甘油氧化酶生產(chǎn)菌株的選育及甘油氧化酶酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、甘油氧化酶(GlycerolOxidase，GLOX)在氧氣存在的情況下，可將甘油氧化為甘油醛，同時(shí)產(chǎn)生過氧化氫。甘油氧化酶可以替代甘油激酶和甘油磷酸氧化酶對(duì)血液中甘油三脂進(jìn)行測(cè)定。甘油氧化酶還可將乙二醇經(jīng)由羥乙醛氧化為乙二醛，可將乙醇酸氧化為乙醛酸。因?yàn)槊复呋磻?yīng)的速度快，無副產(chǎn)品產(chǎn)生，如將其用于工業(yè)生產(chǎn)乙二醛和乙醛酸，具有廣泛的應(yīng)用前景。 本研究從一株產(chǎn)甘油氧化酶的日本曲霉(AspergillusjaponicusSaito

2、)As8586出發(fā)，首先對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行了一系列的研究，然后分別通過紫外線和亞硝基胍誘變，獲得一株相對(duì)穩(wěn)定高產(chǎn)的誘變菌株Aj100015，其酶活力達(dá)到2.1U/ml；最后設(shè)計(jì)單因子實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)原始培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果在含4％甘油，0.4％酵母浸膏，0.13％K2HPO4，0.05％KCl，0.1％MgSO4，0.018％FeSO4，0.1％玉米漿，初始pH為6.2的培養(yǎng)基中，于30℃，200轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，培養(yǎng)48小時(shí)，產(chǎn)生的甘油

3、氧化酶活力最高，達(dá)到4.1U/ml。 通過收集菌體，高壓破碎，硫銨鹽析，SephadexG-25凝膠過濾，QSepharoseHP離子交換，SephacrylS-300凝膠過濾層析對(duì)甘油氧化酶蛋白進(jìn)行了分離純化，并通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳確定其分子量為416KD，經(jīng)SDS-PAGE確定其由八個(gè)分子量約為52.3KD的亞基組成。等電聚焦電泳測(cè)得其等電點(diǎn)為4.9。 甘油氧化酶在以甘油為底物時(shí)，最適作用溫度為37℃，最適p