草木樨屬與柑橘屬藥材抑制黃嘌呤氧化酶物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、黃嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase，XOD）是體內(nèi)核酸代謝中重要的酶，能催化黃嘌呤和次黃嘌呤的氧化生成尿酸，同時產(chǎn)生過氧化物自由基。尿酸濃度過高將導(dǎo)致高尿酸血癥，高尿酸血癥是引起痛風(fēng)的重要生化基礎(chǔ)。通過抑制XOD的活性降低體內(nèi)尿酸的含量從而防治痛風(fēng)。
　　據(jù)文獻報道，草木樨屬植物白花草木樨（Melilotus Albus）和柑橘屬藥食同源藥材枳實（Aurantii Fructus Immaturus）、青皮（Citri

2、 Reticulatae Pericarpium Viride）、陳皮（Citri Reticulatae Pericarpium）、橘紅（Citri Exocarpium Rubrum）、佛手（Fructus Citri Sarcodactylis）、香櫞（Citri Fructus）富含黃酮類化合物，黃酮類化合物具有較強的生物活性，包括對XOD的抑制活性。本研究課題期望通過建立白花草木樨與柑橘屬藥材中不同組分的指紋圖譜結(jié)合體外黃嘌呤

3、氧化酶抑制活性實驗進行綜合分析，分離鑒定出抑制黃嘌呤氧化酶的活性化合物并明確其物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機制。
　　本實驗通過優(yōu)化不同色譜柱、流動相組成和檢測波長等色譜條件，建立了白花草木樨和柑橘屬藥材提取物HPLC分析方法。以黃嘌呤為底物，通過HPLC法測定尿酸生成量從而評價化合物對黃嘌呤氧化酶抑制活性強弱，利用活性篩選模型測定各不同組分對XOD抑制作用。結(jié)果顯示，白花草木樨除水組分外，各萃取組分均有一定的抑制活性，其中乙酸乙酯萃取組分為有

4、效組分（200μg/mL濃度下抑制率為66.93±1.52％）。柑橘屬不同藥材70%乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇不同溶劑提取物的抑制活性以枳實、青皮乙酸乙酯提取物的抑制活性較高（200μg/mL濃度下枳實、青皮的抑制率分別為60.70±0.74%、50.15±0.44%）。
　　綜合運用十八烷基鍵合硅膠柱色譜（ODS）和制備液相色譜（Preparative HPLC）等技術(shù)從白花草木樨的乙酸乙酯萃取組分中分離得到2個活性化合物，

5、綜合運用1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)分別為芹菜素（化合物1）和苜蓿素（化合物2）。從枳實乙酸乙酯提取物中分離得到7個化合物，其中包括5個黃烷酮類化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為：柚皮苷（化合物3）），橙皮苷（化合物4），新橙皮苷（化合物5），柚皮素（化合物6），橙皮素（化合物7）；兩個多甲氧基黃酮類，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為川陳皮素（化合物8）和桔皮素（化合物9）。
　　單體化合物黃嘌呤氧化酶體外活性和酶動力學(xué)實驗，發(fā)現(xiàn)