MiR--21--5p和MiR--150--5p在結外NK-T細胞淋巴瘤組織中的表達及臨床意義.pdf

1、目的:
　　腫瘤，作為嚴重威脅人類健康并且影響人類生活質量的疾病之一，是臨床科研工作者一直研究探索的重點項目，腫瘤分為良性腫瘤及惡性腫瘤，其中惡性腫瘤尤其影響人類生命。淋巴瘤作為一種起源于淋巴結以及淋巴結外的淋巴組織惡性腫瘤，在兒童、年輕人好發(fā)腫瘤中是最常見的惡性腫瘤之一。世界衛(wèi)生組織(WHO)淋巴瘤分類中定義各種類型的淋巴瘤都應該具有其獨立的組織病理學特點、免疫表型、分子遺傳學以及臨床表現(xiàn)。淋巴瘤定義為兩大類，即霍奇金淋巴瘤和非

2、霍奇金淋巴瘤。在2016年WHO更新版的造血與淋巴組織腫瘤分類中，非霍奇金淋巴瘤的包括60余種不同種類，其被認為是所有腫瘤中分類最為復雜的類型。結外NK/T細胞淋巴瘤(Extranodal NK/T cell lymphoma，ENKTCL)是一種罕見的并且具有侵襲性的非霍奇金淋巴瘤亞型，其與潛在Epstein Barr病毒(EBV)感染密切相關，此類型淋巴瘤具有較強的侵襲性，并且預后不良，主要發(fā)生于亞洲和拉丁美洲的國家，其是我國淋巴瘤

3、最常見的亞型之一。針對傳統(tǒng)的蒽環(huán)類化療作用，結外NK/T細胞淋巴瘤與其他類型的淋巴瘤相對比，在治療方面上其具有較強的抵抗力。目前，因結外NK/T細胞淋巴瘤的惡性程度高，侵襲性強，對人類生命的威脅程度高，在標準化治療方法上還沒有統(tǒng)一的認定，因此研究結外NK/T細胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展機制，相關預后指標或者尋找其新的治療靶點具有著重要的意義。
　　微小RNA（microRNA，miRNA）是小的非編碼RNA，由18-25個核苷酸組成，通過

4、幾種不同機制來發(fā)揮作用，可以在轉錄后水平對靶基因起到負性調控的作用，它們在調節(jié)細胞的生長、發(fā)育、凋亡、侵襲、轉移和造血過程中發(fā)揮著重要的生物學作用。MiRNA通過阻止mRNA的翻譯或者調節(jié)mRNA的降解來調控靶基因表達，每個類型的細胞miRNA類型及表達情況各不相同，因此可以將miRNA作為靶細胞的標記物。因此，檢測并分析miRNA在腫瘤細胞中的類型及表達量可以作為淋巴瘤治療及分析預后的重要指標。
　　MiR-21-5p是由miR

5、-21前體的5'端臂加工而來的，人類miR-21基因位于染色體17q23.2正鏈。腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中包括很多miRNA的改變，其中就涉及miR-21-5p，其表達與部分腫瘤細胞的浸潤、轉移具有明確的相關性。例如，研究表明，高表達的miR-21-5p可以在非小細胞癌中調節(jié)腫瘤細胞的生長能力、浸潤以及轉移;同樣，低表達的miR-21-5p可以降低腫瘤細胞中相關蛋白的表達水平。MiR-150-5p是由miR-150前體的5'端臂加工而來的，

6、根據(jù)相關研究證據(jù)表明，miR-150-5p在某些腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，其中就包括淋巴造血系統(tǒng)腫瘤。miR-150家族在惡性和正常的B細胞中可以調節(jié)轉錄因子叉頭型基因P1(Forkhead box p2，F(xiàn)OXP1)和接頭蛋白GAB1蛋白的表達水平，同時可以影響B(tài)CR信號通路。研究表明，其被認為有著促進胃癌細胞增殖的作用，也被認為在骨肉瘤中有超過正常組織中表達量50倍的過度表達情況。
　　根據(jù)已發(fā)表文獻顯示，miR-21-

7、5p和miR-150-5p在腫瘤中發(fā)揮著重要的作用，目前在關于結外NK/T細胞淋巴瘤的相關文獻中并沒有關于miR-21-5p和miR-150-5p的具體研究。因此，本課題將miR-21-5p和miR-150-5p應用于結外NK/T細胞淋巴瘤的研究，采用實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)檢測miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T細胞淋巴瘤細胞中的表達情況以及采用原位雜交技

8、術(In situ hybridization，ISH)檢測miR-21-5p和miR-150-5p在結外NK/T細胞淋巴瘤組織中的表達情況，結合相關臨床病理參數(shù)以及預后指標分析探討其在結外NK/T細胞淋巴瘤中所發(fā)揮的關鍵性作用，尋找與其治療相關作用的新靶點，為臨床上患者的治療提供有效的幫助。
　　方法:
　　1.miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T細胞淋巴瘤細胞系中的表達情況由生工生物工程股份有限公司設計合成

9、miR-21-5p和miR-150-5p的特異性引物，內參是U6特異性引物，利用qRT-PCR檢測人類正常NK細胞以及NK/T細胞淋巴瘤細胞系NK92和YT中miR-21-5p和miR-150-5p的表達量。
　　2.miR-21-5p和miR-150-5p在結外NK/T細胞淋巴瘤石蠟切片組織中的表達及臨床意義
　　2.1.收集并篩選結外NK/T細胞淋巴瘤的石蠟組織標本40例，以20例鼻腔粘膜慢性炎的標本作為對照組織。

10、>　　2.2.采用原位雜交法檢測結外NK/T細胞淋巴瘤標本組織及對照組織鼻腔粘膜慢性炎的標本組織中miR-21-5p和miR-150-5p相對表達量。
　　2.3.用SPSS21.0軟件對miR-21-5p和miR-150-5p表達與結外NK/T細胞淋巴瘤患者臨床病理參數(shù)的關系進行統(tǒng)計學分析，包括年齡、性別、B癥狀、血清LDH水平、Ann Arbor臨床分期及IPI評分。
　　2.4.單因素及多因素分析miR-21-5p和m

11、iR-150-5p表達與以上臨床病理參數(shù)及患者臨床預后的相關性。
　　結果:
　　1.miR-21-5p和miR-150-5p在NK/T細胞淋巴瘤細胞株NK92及YT中的表達與人類正常NK細胞株比較，表達量明顯上調。
　　2.與對照組鼻腔粘膜慢性炎相比，結外NK/T淋巴瘤組織中的miR-21-5p和miR-150-5p的表達水平明顯增高。
　　3.miR-21-5p的表達水平與患者年齡、性別、血清LDH水平、B癥

12、狀、Ann Arbor臨床分期以及IPI評分無關(P＞0.05)。miR-150-5p的表達水平與患者的IPI評分有關(P＜0.05)，而與患者年齡、性別、血清LDH水平、B癥狀以及Ann Arbor臨床分期無關(P＞0.05)。
　　4.miR-21-5p和miR-150-5p的表達與患者總生存率無明顯相關性(P＞0.05)，IPI評分（≥2分）可能為患者預后不良的獨立危險因素。
　　結論:
　　1.miR-21-5