高危鼻型結(jié)外NK-T細胞性淋巴瘤臨床及相關(guān)實驗研究.pdf

1、本文對高危鼻型結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤臨床及相關(guān)實驗進行了研究。文章分為三個部分：
　　 第一部：分結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤治療模式研究。
　　 目的：WHO分類中將結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤(ENKCL；extranodal NK/T-celllymphoma)作為一種獨特的病理亞型。在亞洲地區(qū)發(fā)病率較高，與EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)關(guān)系密切，臨床表現(xiàn)為高度侵襲性的過程，預后很差，至今未建立

2、標準的治療。對于Ⅰ期局限性鼻腔NK/T細胞性淋巴瘤放療可能起治愈性作用。對于Ⅱ期以上的患者治療效果并不滿意。因此我們收集210例NK/T細胞性淋巴瘤來探討其臨床病理特征和治療模式。
　　 方法：收集1997年至2008年的210例經(jīng)病理證實為ENKCL且臨床資料完整的患者，根據(jù)不同治療方法、部位和分期進行分析CR率、PFS和OS。
　　 結(jié)果：與鼻外病變對比，鼻腔病變早期(Ⅰ/Ⅱ期)患者較多。而年齡(p=0.074)，性

3、別(p=0.512)，ECOG PS(p=0.953)，B癥狀(p=0.257)，LDH(p=0.314)和治療模式(p=0.110)，兩不同部位組間無顯著差異。單純化療組(CT)、單純放療組(RT)和聯(lián)合治療組(CMT)的CR率分別為28％(19/69)、67％(20/30)、和78％(86/111)(p＜0.001)。在三個不同治療組鼻腔病變的CR率分別為35％、68％和82％(p＜0.001)；鼻外病變的CR率分別為15％、60％

4、和67％(p＜0.001)。全組患者中位PFS和OS分別為21.0月(95％CI：14.0-27.8月)和33.3月(95％CI：18.2-48.5月)。2年、3年和5年的PFS分別為48％、40％和35％。2年、3年和5年的OS率分別為56％、48％和39％。鼻腔病變與鼻外病變對比3年P(guān)FS和OS具有顯著差異49％vs.18％(p＜0.001)和55％vs31％(p=0.001)。對比CT組患者，CMT組3年OS顯著延長(p=0.00

5、1)，3年P(guān)FS p值處于臨界值(p=0.058)。與CT組對比，鼻腔病變CMT組3年P(guān)FS和OS顯著延長(PFS：p=0.005；OS：p=0.001)；而鼻外病變兩治療組3年OS有顯著差異，3年P(guān)FS未見統(tǒng)計學差異(PFS：p=0.692；OS：p=0.019)。全身復發(fā)與治療模式(p=0.389)和發(fā)病部位(p=0.279)無關(guān)。
　　 結(jié)論：ENKCL患者預后較差，生存期較短，對一般的化療方案敏感性差，易于復發(fā)。放療在早

6、期患者中發(fā)揮重要作用，但有效的化療在提高CR率和降低全身復發(fā)方面仍然有作用，特別是對于晚期和鼻外病變。需要探索更有效的化療方案以提高CR率和生存期。鼻腔和鼻外病變是兩種性質(zhì)和不同的病變。但是不論鼻腔還是鼻外病變應該采用有效的化療以延長PFS，減少全身復發(fā)。
　　 第二部分：血漿miR-221表達在結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤中的意義。
　　 目的：由于部分T細胞淋巴瘤的臨床、預后特點與結(jié)外鼻型NK細胞性淋巴瘤較為相似，WHO

7、分型系統(tǒng)也將此部分T細胞淋巴瘤與結(jié)外鼻型NK細胞性淋巴瘤合為一體，統(tǒng)稱為結(jié)外鼻型NK/T細胞性淋巴瘤(ENKCL)。ENKCL對放化療均不甚敏感，即使是Ann Arbor分期(1)較早的疾病，其治療效果也往往較差。因此，尋找適合ENKCL患者的不良預后因素，在治療前將病人根據(jù)化療敏感性及危險度區(qū)分開來進行個體化治療，是臨床上值得研究的課題。miRNAs是一種內(nèi)源性小片段(～22 bp)非編碼的RNA，主要通過與靶mRNA的3'-UTR區(qū)

8、堿基配對調(diào)節(jié)基因表達，進而抑制表達、mRNA斷裂或不穩(wěn)定。在腫瘤相關(guān)的調(diào)節(jié)基因中miRNAs的功能可以作為腫瘤抑制基因或癌基因。一些研究顯示外周血的血清和血漿中存在著miRNA的表達。而且miRNA直接擴增與從血漿中提取總RNA然后進行擴增結(jié)果一致，因此直接對外周血中的miRNA進行擴增是可行的。一些miRNA在腫瘤細胞耐藥方面發(fā)揮著重要作用，如miR-221、miR-222和miR-451，因此我們觀察血漿中miRNAs(miR-22

9、1/222/451)的表達與正常健康人是否有差別，并分析其表達水平與臨床特征和治療效果的相關(guān)性。
　　 方法：收集79例ENKCL患者化療前血漿及37例正常健康人血漿。通過直接對血漿中miR-221進行逆轉(zhuǎn)錄和real-time PCR技術(shù)擴增檢測外周血miR-221表達水平，分析各檢測指標與患者臨床特征、療效、預后之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：與37例正常健康人對比，79例ENKCL患者血漿miR-221表達顯著升高(p=

10、0.038)。進一步分析顯示miR-221與性別和ECOG PS相關(guān)。經(jīng)單因素和多因素分析發(fā)現(xiàn)血漿miR-221水平(p=0.003)、年齡(p＜0.001)、B癥狀(p=0.025)、LDH(P=0.003)和初始治療后CR(p＜0.001)為獨立的預后因素。
　　 結(jié)論：血漿miR-221在結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤患者中顯著增高，并且升高的患者PS狀態(tài)和長期療效差，血漿miR-221可以作為結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤輔助診斷指

11、標，并可以作為獨立的預后因素。
　　 第三部分：結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤起源細胞中microRNA表達研究。
　　 目的：WHO分類中將結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤(ENKCL；extranodal NK/T-celllymphoma)作為一種獨特的病理亞型。該病變對化療耐藥，緩解后易于復發(fā)，生存期短。腫瘤起源細胞和正常干細胞一樣具有自我更新、增殖潛能較低并可以產(chǎn)生多種不同增殖能力的表型不同的前體細胞，而且和正常干細胞一樣對

12、化療和放療耐受性很強。近年來在多種惡性腫瘤中證實ALDH-1活性和表達可以作為腫瘤起源細胞的標記。MicroRNAs(miRNAs)是一類長約21～23個核苷酸(bp)非編碼的單鏈小分子RNA，通過與靶mRNA的3'非翻譯區(qū)(3'-UTR)堿基配對在轉(zhuǎn)錄后水平抑制靶mRNA的降解或翻譯過程進而起調(diào)控基因表達的作用。為了尋求治愈結(jié)外NK/T細胞性淋巴瘤的潛在靶點，以減少復發(fā)，爭取徹底根治該腫瘤，我們嘗試對NK/T細胞性淋巴瘤起源細胞調(diào)控的

13、miRNAs進行研究，以期發(fā)現(xiàn)調(diào)控這類細胞的可能的“干細胞miRNAs”。
　　 方法：應用SNK-6和SNT-8細胞兩種培養(yǎng)體系培養(yǎng)通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期、p-GP和ALDH-1的表達水平及ALDH-1活性改變，進一步行microRNA芯片檢測并通過qRT-PCR驗證鑒定與腫瘤起源細胞相關(guān)的microRNAs。
　　 結(jié)果：SNK-6細胞在干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)后p-GP和ALDH-1表達水平及活性均較一般培養(yǎng)基培養(yǎng)升高

14、(p-GP表達：75.1％vs27.4％；ALDH-1表達：25.1％vs0.8％；ALDH-1活性：3.6％vs1.1％)，細胞周期G0/G1期比率升高，S期降低(G0/G1期：83.21％vs38.89％；S期：46.63％vs10.55％)。同樣SNT-8細胞在干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)后p-GP和ALDH-1表達水平及活性均較一般培養(yǎng)基培養(yǎng)升高(p-GP表達：40.1％vs12.9％；ALDH-1表達：14.0％vs1.6％；ALDH-1

15、活性：0.9％vs0.1％)，細胞周期G0/G1期比率升高，S期降低(G0/G1期：78.8％vs40.28％；S期：50.29％vs10.90％)。經(jīng)MicroRNA芯片檢測，SNT-8組共檢出70個基因在干細胞培養(yǎng)體系中升高(升高比率大于2)，一個基因即miR-17表達降低(降低比率小于0.5)。SNK-6組共檢出9個基因在干細胞培養(yǎng)體系中升高(升高比率大于2)，17個基因表達降低(降低比率小于0.5)。經(jīng)qRT-PCR驗證發(fā)現(xiàn)在兩