TLR4-MyD88的蛋白表達(dá)與AngⅡ誘導(dǎo)心肌肥厚關(guān)系的研究.pdf

1、目的研究TLR4/MyD88的蛋白表達(dá)與AngⅡ誘導(dǎo)心肌肥厚的關(guān)系
　　方法選取21只8-10周齡的C57BL/6雄性小鼠，隨機(jī)分為三組:正常對(duì)照組（簡(jiǎn)稱對(duì)照組），心肌肥厚組（簡(jiǎn)稱肥厚組），心肌肥厚藥物干預(yù)組（簡(jiǎn)稱肥厚干預(yù)組），每組7只。三組均皮下埋植微滲透泵，其中對(duì)照組以1.3mg/Kg/day的速度連續(xù)泵入生理鹽水，肥厚組及肥厚干預(yù)組以1.3mg/Kg/day的速度連續(xù)泵入AngⅡ;期間對(duì)照組與肥厚組每周2次腹腔注射生理鹽水，

2、肥厚干預(yù)組每周2次腹腔注射TAK242。觀察4周后處死小鼠，低溫下快速取出心臟，置于提前預(yù)冷的生理鹽水中，輕柔擠出心腔內(nèi)的血液，反復(fù)2-3次后無菌紗布吸干心臟水分，以心臟最寬處及心尖部為切點(diǎn)，將心臟分成3部分，其中心室上段用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，RT-PCR)經(jīng)RNA提取，逆轉(zhuǎn)錄，cDNA擴(kuò)增過程檢測(cè)β肌球蛋白重鏈(beta-myosin heavy chain，β-MHC)mRNA表

3、達(dá);心室中段置于福爾馬林中固定，經(jīng)常規(guī)脫水，透明，包埋后石蠟切片用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining，HE)觀察心肌細(xì)胞形態(tài);心尖部用蛋白免疫印跡(Western Blot，WB)經(jīng)蛋白質(zhì)提取，電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，一抗孵育，二抗孵育，化學(xué)發(fā)光，顯影，定影過程檢測(cè)TLR4和MyD88的蛋白表達(dá)水平。數(shù)據(jù)均采用SPSS20.0軟件分析處理，P＜0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　1.

4、各組小鼠心肌細(xì)胞形態(tài)變化
　　肥厚組心肌細(xì)胞橫截面積明顯大于對(duì)照組（3710.21±378.45vs1804.35±310.18，P＜0.01），肥厚干預(yù)組小鼠心肌細(xì)胞橫截面積明顯小于肥厚組(3125.14±734.46vs3710.21±378.45,P＜0.01)。
　　2.各組心肌細(xì)胞β-MHC mRNA表達(dá)變化
　　肥厚組心肌細(xì)胞β-MHC mRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組（P＜0.05），予TAK242干預(yù)后肥厚鼠

5、心肌細(xì)胞β-MHC mRNA表達(dá)受到抑制(P＜0.05)。
　　3.各組心肌細(xì)胞TLR4、MyD88的表達(dá)變化
　　肥厚組心肌細(xì)胞TLR4、MyD88的表達(dá)水平高于對(duì)照組(P＜0.05)，予TAK242干預(yù)后肥厚鼠心肌細(xì)胞TLR4、MyD88的蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　1.在AngⅡ誘導(dǎo)的心肌肥厚中，TLR4和MyD88的蛋白表達(dá)水平增高。
　　2.TAK242干預(yù)抑制TLR4和My