三叉神經(jīng)痛對(duì)大鼠神經(jīng)退行性變的影響及CD95-CD95L通路在其中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究發(fā)現(xiàn)慢性疼痛患者發(fā)生神經(jīng)退行性變（如癡呆）的風(fēng)險(xiǎn)更高，但其機(jī)制尚不清楚。神經(jīng)病理性疼痛是常見(jiàn)的慢性疼痛，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)病理性疼痛可導(dǎo)致神經(jīng)炎癥及神經(jīng)元凋亡，后者在神經(jīng)退行性變的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，而CD95/CD95L通路是神經(jīng)炎癥及神經(jīng)元凋亡的關(guān)鍵因素。由此假設(shè)，神經(jīng)病理性疼痛可能激活CD95/CD95L通路，誘發(fā)神經(jīng)炎癥及神經(jīng)元凋亡，從而導(dǎo)致神經(jīng)退行性變的發(fā)生。為驗(yàn)證此假設(shè)，設(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)擬在大鼠三

2、叉神經(jīng)痛模型上觀察三叉神經(jīng)痛對(duì)大鼠神經(jīng)退行性變的影響，并探討其機(jī)制是否與CD95/CD95L通路相關(guān)，為預(yù)防和干預(yù)三叉神經(jīng)痛患者出現(xiàn)神經(jīng)退行性變提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.復(fù)制動(dòng)物模型：成年雄性SD大鼠60只，按隨機(jī)數(shù)字法分為兩組：手術(shù)組（ION-CCI組，n=30）和假手術(shù)組（Sham組，n=30），Sham組為對(duì)照。ION-CCI組結(jié)扎右側(cè)眶下神經(jīng)，行眶下神經(jīng)慢性縮窄環(huán)術(shù)(Infraorbital nerve c

3、hronic constriction injury,ION-CCI)建立三叉神經(jīng)痛模型，Sham組僅暴露眶下神經(jīng)，而不結(jié)扎眶下神經(jīng)。
　　2.痛閾檢測(cè)：兩組分別在術(shù)前、術(shù)后1d、7d、15d、30d各隨機(jī)抽取10只大鼠，用Von Frey Filament感覺(jué)測(cè)試器行機(jī)械痛閾測(cè)試。
　　3.Morris水迷宮試驗(yàn)：在術(shù)后1d、15d、30d，兩組各隨機(jī)抽取10只大鼠進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)，分別記為T(mén)est1、Test2

4、、Test3。觀察游泳速度、逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)、目標(biāo)象限時(shí)間百分比等的變化。
　　4.大鼠神經(jīng)退行性變相關(guān)蛋白的檢測(cè)：完成水迷宮實(shí)驗(yàn)后處死大鼠，即術(shù)后5d、19d、34d，通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血清S100β蛋白濃度及海馬Aβ1-42蛋白的表達(dá)情況，Western blotting方法檢測(cè)海馬總Tau蛋白的表達(dá)情況，免疫熒光及Western blotting方法檢測(cè)Tau蛋白在Ser404位點(diǎn)的磷酸化水平。
　　5.C

5、D95/CD95L通路相關(guān)蛋白的檢測(cè)：在術(shù)后5d、19d、34d，通過(guò)免疫熒光及Western blotting方法檢測(cè)CD95、CD95L、Cleaved-caspase3蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.復(fù)制動(dòng)物模型的結(jié)果
　　Sham組3只于麻醉后死亡。ION-CCI組2只于麻醉后死亡，1只于術(shù)后死亡，1只在術(shù)后無(wú)明顯痛閾變化。重新選取7只大鼠按隨機(jī)數(shù)字法分入兩組，共計(jì)60只大鼠計(jì)入本次研究。
　　2.

6、兩組大鼠機(jī)械痛閾的比較
　　Sham組大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的痛閾較術(shù)前無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。ION-CCI組在術(shù)后1d高于術(shù)前水平（P＜0.05）;7d、15d、30d均低于術(shù)前(P＜0.05)，15d最低，30d次之。ION-CCI組術(shù)后1d痛閾高于Sham組(P＜0.05)，術(shù)后15d及30d痛閾低于同時(shí)間點(diǎn)Sham組(P＜0.05)。
　　3.大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　Sham組術(shù)后三次測(cè)試結(jié)果無(wú)統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。ION-CCI組大鼠Test1、Test2、Test3的逃避潛伏期依次延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)次數(shù)依次減少，目標(biāo)象限時(shí)間百分比依次降低，兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。兩組大鼠術(shù)后游泳速度組內(nèi)、組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。與Sham組比較，ION-CCI組大鼠Test1無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，Test2和Test3的逃避潛伏期延長(zhǎng)（P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)及目標(biāo)象限時(shí)間百分比減少（P＜0.05

8、）。
　　4.大鼠神經(jīng)退行變相關(guān)蛋白表達(dá)的變化
　　Sham組：血清S100β蛋白濃度、海馬Aβ1-42及Ser404P-Tau蛋白的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。ION-CCI組：血清S100β蛋白濃度術(shù)后19d最高，34d次之，5d最低，組內(nèi)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，其中19d與5d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。海馬Aβ1-42及Ser404P-Tau蛋白表達(dá)術(shù)后34d最高，19d次之，5d最低，兩

9、者組內(nèi)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，其中Aβ1-42蛋白表達(dá)34d與5d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，Ser404P-Tau蛋白表達(dá)34d、19d均與5d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。兩組大鼠Total-Tau蛋白的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　與Sham組比較，在術(shù)后19d和34d，ION-CCI組血清S100β蛋白濃度、海馬Aβ1-42及Ser404P-Tau蛋白的表達(dá)增加(P＜0.05);術(shù)后5d，兩組無(wú)統(tǒng)

10、計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5.CD95/CD95L信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的變化
　　Sham組：海馬CD95、CD95L及Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。ION-CCI組：海馬CD95、CD95L蛋白表達(dá)術(shù)后19d最高，34d次之，5d最低，兩者組內(nèi)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），其中CD95蛋白表達(dá)19d與5d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，CD95L蛋白表達(dá)34d、1

11、9d均與5d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)術(shù)后19d最高，5d次之，34d最低，組內(nèi)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），其中5d、34d均與19d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　與Sham組比較，ION-CCI組CD95蛋白在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)增高(P＜0.05);CD95L蛋白在術(shù)后15d和30d表達(dá)高于Sham組（P＜0.05）;Cleaved-caspase3蛋白在術(shù)后5d和19d表

12、達(dá)高于Sham組(P＜0.05)。
　　ION-CCI組Cleaved-caspase3蛋白的表達(dá)與CD95蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.570，P=0.027），也與CD95L蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.650，P=0.009)。
　　結(jié)論：
　　1.三叉神經(jīng)痛大鼠可出現(xiàn)神經(jīng)退行性變特征，包括學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行性下降，血清S100β蛋白濃度、海馬Aβ1-42、Ser404P-Tau蛋白表達(dá)增加。
　　2.三叉神經(jīng)痛