大鼠肝細(xì)胞中能與銅配合物結(jié)合的蛋白質(zhì)提取純化與鑒定.pdf

1、金屬配合物具有治療糖尿病、癌癥、阿爾茲海默癥等疾病的潛力，受到廣泛關(guān)注。早期研究金屬藥物的抗癌活性主要以DNA為靶點(diǎn)，隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展，與重要疾病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的蛋白質(zhì)作為靶標(biāo)的金屬藥物研究越來(lái)越受到人們的重視。
　　 最近研究表明銅配合物可以通過(guò)抑制蛋白體的胰凝乳蛋白酶樣活性、蛋白酪氨酸磷酸酶活性等抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)，還能減少β淀粉樣蛋白的生成具有治療阿爾茲海默癥的潛力。那么銅配合物到底能與體內(nèi)多少種蛋白結(jié)合并影響生理作用

2、呢？本論初步提取、純化與鑒定了大鼠肝細(xì)胞中能與銅配合物結(jié)合的蛋白質(zhì)，以及初步研究純化蛋白質(zhì)與不同結(jié)構(gòu)銅配合物的結(jié)合作用，尋找銅配合物的蛋白質(zhì)靶標(biāo)。具體工作及成果如下:
　　 1.采用原位消化法、Percoll單密度梯度離心法及糖原染色法從大白鼠肝臟中提取并且純化肝細(xì)胞，得到的肝細(xì)胞純度達(dá)到95％以上。
　　 2.通過(guò)銅離子親和層析、聚丙烯酰胺凝膠電泳等初步提取鑒定大鼠肝臟細(xì)胞中97種能與銅配合物結(jié)合的蛋白質(zhì)，及其蛋白質(zhì)的

3、種類(lèi)、分子質(zhì)量以及在樣品中的含量。并且通過(guò)陰陽(yáng)離子交換柱分離、純化了其中3種蛋白質(zhì)，即過(guò)氧化氫酶(ProteinA)、待定蛋白(ProteinB)和鳥(niǎo)氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶(ProteinC)。
　　 3.通過(guò)熒光光譜初步研究了純化蛋白質(zhì)過(guò)氧化氫酶(ProteinA)和另一種純化蛋白質(zhì)(ProteinB)與13個(gè)不同結(jié)構(gòu)的銅配合物的結(jié)合作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:13個(gè)銅配合物對(duì)兩種蛋白質(zhì)的熒光猝滅是靜態(tài)猝滅過(guò)程，其結(jié)合比是1∶1，不同結(jié)構(gòu)