延遲應用不同劑量rhEPO治療大鼠急性擠壓性胸脊髓損傷.pdf

1、目的：
　　全面系統(tǒng)的評估延遲應用不同劑量的促紅細胞生成素治療大鼠急性擠壓性胸脊髓損傷的神經(jīng)保護作用。
　　方法：
　　本實驗將分為兩個階段進行，在第一階段中，共有32只健康雄性SD大鼠，將其平均隨機分為4組:對照組（A組，N=8）:按脊髓擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時、1、3天給予腹腔注射生理鹽水1ml，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉(100000U/kg)，預防術(shù)后感染;3000U實驗組（B組，N=

2、8）:按脊髓擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時、1、3天給予腹腔注射促紅細胞生成素（3000U/kg），此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉(100000U/kg)，預防術(shù)后感染;4000U實驗組（C組，N=8）:按脊髓擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時、1、3天給予腹腔注射促紅細胞生成素（4000U/kg），此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉（100000U/kg），預防術(shù)后感染;5000U實驗組（D組，N=8）:按脊髓

3、擠壓的方法造模后，分別在術(shù)后2小時、1、3天給予腹腔注射促紅細胞生成素(5000U/kg)，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉（100000U/kg），預防術(shù)后感染。在第二階段實驗中，按與第一階段同樣實驗的方法，將24只健康雄性SD大鼠同樣隨機分為4組:對照組(Aa組，n=6):按照第一階段相同的造模方法，造模成功后，給予脊髓損傷大鼠1ml生理鹽水腹腔注射在術(shù)后2小時、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射

4、青霉素鈉（100000U/kg），預防術(shù)后感染;3000U（Bb組，n=6）:脊髓損傷大鼠被給予促紅細胞生成素(3000U/kg)通過腹腔注射在術(shù)后2小時、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉(100000U/kg)，預防術(shù)后感染;4000U（Bb組，n=6）:脊髓損傷大鼠被給予促紅細胞生成素(4000U/kg)通過腹腔注射在術(shù)后2小時、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉

5、(100000U/kg)，預防術(shù)后感染;5000U(Bb組，n=6):脊髓損傷大鼠被給予促紅細胞生成素（5000U/kg）通過腹腔注射在術(shù)后2小時、1、3、8、15、22天，此外，術(shù)前及術(shù)后第一天給予腹腔注射青霉素鈉（100000U/kg），預防術(shù)后感染。主要的觀察及研究指標:在第一階段的實驗SD大鼠，造模后共觀察4天，在術(shù)后-1（術(shù)前）、0、1、2、3、4天行BBB評分，術(shù)后第4天行BBB評分后予以過量的戊巴比妥鈉腹腔注射處死，取損傷

6、脊髓節(jié)段用于炎癥指數(shù)、凋亡指數(shù)、組織病理觀察及脊髓超微結(jié)構(gòu)的研究;在實驗第二階段的SD大鼠，共被觀察4周，在術(shù)后-1、0、2、4、7、14、21、28天行BBB評分及固藍染色(LFB)。
　　脊髓損傷造模方法：
　　實驗動物先在動物飼養(yǎng)房（溫度20±3℃，濕度50±20％，每日光照12h）內(nèi)適應環(huán)境1周，每籠2只大鼠，自由進食、水。動物于術(shù)前12小時禁食、水，為了預防術(shù)后感染，術(shù)前30min給予青霉素鈉(200000U/kg

7、)肌肉注射。戊巴比妥鈉(70mg/kg)腹腔注射麻醉后，將大鼠俯臥位固定于手術(shù)臺上，用剪刀減去手術(shù)區(qū)域的毛發(fā)，然后用3％碘伏消毒手術(shù)區(qū)，在無菌條件下行背部正中切開約2cm長的切口，以T13為標志，暴露T8～T12的棘突、橫突及椎板，應用外科顯微器械，仔細去除T10的終板及黃韌帶，顯露T10水平的脊髓，用閉合力為70g的動脈瘤夾夾持脊髓1 min，然后去除動脈瘤夾，生理鹽水沖洗切口后逐層縫合切口，再次用3％碘伏消毒手術(shù)切口。在手術(shù)期間，用

8、一個加熱墊來維持大鼠的體溫，直至大鼠術(shù)后完全蘇醒。術(shù)后每只大鼠立即腹腔注射10％葡萄糖注射液2ml，0.9％的氯化鈉注射液5ml，大鼠完全蘇醒后，按每籠2只送回飼養(yǎng)室，術(shù)后每天人工輔助排尿2-3次/日。
　　療效評估指標：
　　BBB運動功能評分、組織病理評級、凋亡指數(shù)、炎癥指數(shù)、脊髓超微結(jié)構(gòu)評分及脫髓鞘面積;
　　統(tǒng)計學方法：
　　SPSS19.0((SPSS Inc.，Chicago，IL，USA))統(tǒng)計學軟

9、件被用于分析實驗數(shù)據(jù)。除了組織病理學評級結(jié)果，其他數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，在不同的研究時間點的BBB運動功能評分用重復測量數(shù)據(jù)的兩因素的ANOVA and post hoc LSD檢驗，膠質(zhì)細胞數(shù)、神經(jīng)元細胞數(shù)、脊髓超微結(jié)構(gòu)評分用one-way ANOVA and post hoc LSD檢驗。對于非參數(shù)數(shù)據(jù)包括炎癥指數(shù)、凋亡指數(shù)、組織病理評級、脫髓鞘面積百分比則用Kruskal-Wallis檢驗比較組間差異，如果

10、方差分析顯示:組間差異具有統(tǒng)計學意義，各組之間的比較則用多個獨立樣本之間比較的Nemenyi檢驗。當P＜0.05時，則表示差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　在第一階段實驗中，32只SD大鼠共被觀察4天，各實驗組及對照組的BBB運動功能評分在術(shù)后第4天分別為:A組(0.375±0.518);B組(2.625±0.744);C組(3.125±0.641);D組(4.500±0.756)，且在整個4天的研究期間，最好的運動功能

11、評分被觀察到在D組，此外，各實驗組運動功能的改善均好于A組(P＜0.01)在此期間。在第二階段實驗中，24只脊髓損傷SD大鼠共被觀察4周，在術(shù)后第28天的BBB運動功能評分分別為:Aa組(7.833±1.472); Bb組(12.333±0.816); Cc組(12.833±0.753); Dd組(14.500±0.548)，最好的運動功能改善情況同樣在Dd組被觀察到，各實驗組的運動功能改善情況均好于Aa組(P＜0.001)，此外，在第

12、一和第二階段的實驗中，3000U組和4000U組在改善急性胸脊髓損傷的大鼠運動功能方面作用相似(P＞0.05)，盡管4000U組平均BBB運動功能評分稍微高于3000U組。組織病理學方面，5000U組獲得最好的組織病理學改善，而3000U組和4000單位組在組織病理學改善方面差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但各實驗組的病理改善情況好于對照組(P＜0.05)。各實驗組的炎癥指數(shù)及凋亡指數(shù)均小于對照組(P＜0.05)，但各實驗組之間無統(tǒng)計

13、學差異(P＞0.05)。實驗組的脊髓損傷超微結(jié)構(gòu)評分均好于對照組(P＜0.001)，但各實驗組在改善脊髓損傷超微結(jié)構(gòu)方面無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。就脫髓鞘面積百分比而言，實驗組的脊髓損傷超微結(jié)構(gòu)評分均好于對照組(P＜0.005)，且最好的髓鞘保護作用在5000U組被觀察到。
　　結(jié)論：
　　(1)、延遲應用促紅細胞生成素治療急性大鼠胸脊髓損傷具有神經(jīng)保護作用;
　　(2)、延遲應用促紅細胞生成素具有降低細胞凋亡、調(diào)