慢性壓迫性胸脊髓損傷與細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究.pdf

1、目的:1.建立一種理想、實用的慢性脊髓壓迫模型,為探索慢性壓迫性脊髓損傷的病理生理機(jī)制奠定基礎(chǔ)。2.通過TUNEL法檢測慢性受壓脊髓的神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況,探討細(xì)胞凋亡在慢性脊髓損傷中的意義。3.通過免疫組化學(xué)方法檢測受壓脊髓組織中TNF-R1和Cyto-c的表達(dá)情況,探討慢性壓迫性脊髓損傷中細(xì)胞凋亡的機(jī)制。為臨床采取生化治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:1.健康雌性wistar大鼠40只(250±20g,8-12周齡),采用隨機(jī)數(shù)字

2、表法將其分為脊髓壓迫組(n=30)、對照組(n=10)。壓迫組分為3周,6周和9周組,每組10只動物。2.壓迫組動物于胸9行后路椎板切除,在T8-T10間植入自行設(shè)計的脊髓壓迫裝置。每隔7天將螺釘擰入1周(0.5mm),直至3周.螺釘通過一鋼墊片對脊髓施壓,行胸椎側(cè)位X線片檢查,評估裝置的位置和胸椎管狹窄程度。于3,6,9周后行后肢運(yùn)動功能評分(BBB評分)。對照組的動物只作后路椎板切除,于第9周行后肢運(yùn)動功能的BBB評分。手術(shù)過程中,

3、出現(xiàn)急性脊髓損傷的動物除外。3.BBB評分后取脊髓標(biāo)本,每組10只,其中8只動物標(biāo)本制作石蠟切片行HE染色觀察受壓組織的病理變化。2只動物脊髓標(biāo)本在-20℃冰箱冷凍5min后切片,行TTC染色觀察脊髓的缺血情況。壓迫組和對照組脊髓石蠟切片,用TUNEL法檢測脊髓中神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況,用免疫組織化學(xué)方法檢測TNF-R1和Cyto-c在脊髓中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1.X線片示壓迫裝置位置良好,脊髓受壓確切。脊髓功能受損存在一定的隱

4、匿性,與對照組相比,3周壓迫組動物BBB評分無明顯降低(p=0.193),6、9周壓迫組動物BBB評分持續(xù)下降,組間存在顯著差異(p<0.05)。2.TTC顯示,受壓部位脊髓周邊部出現(xiàn)片狀蒼白區(qū),且后柱比較顯著。HE染色示壓迫組脊髓灰質(zhì)中出現(xiàn)神經(jīng)元丟失、白質(zhì)脫髓鞘改變,病變隨受壓時間的延長逐漸加重。3.壓迫組脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)中均可見TUNEL陽性細(xì)胞?；屹|(zhì)和白質(zhì)中TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)3周開始增加,6周達(dá)到高峰,9周時較前較少,組間差異有統(tǒng)

5、計學(xué)意義(p<0.05)。4.壓迫組較對照組脊髓中的TNF-R1和Cyto-c陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多。受壓脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)中TNF-R1陽性細(xì)胞數(shù)6周達(dá)到高峰,9周顯著減少,而Cyto-c陽性細(xì)胞數(shù)6周達(dá)到高峰,9周時無明顯降低。
　　 結(jié)論:1.此裝置較好地模擬了慢性脊髓壓迫癥的臨床特征,設(shè)計具有取材方便,方法簡單、科學(xué)、重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),此模型是慢性脊髓壓迫的較理想、實用的模型。2.細(xì)胞凋亡在慢性脊髓壓迫損傷神經(jīng)細(xì)胞丟失中起重要作用