大鼠脊髓慢性壓迫損傷后巢蛋白的表達規(guī)律的初步研究.pdf

1、實驗目的
　　 建立一種新的大鼠脊髓慢性壓迫性損傷模型,為探索脊髓受壓后的病理生理機制奠定基礎(chǔ)。探究慢性壓迫損傷后巢蛋白(nestin神經(jīng)干細胞的標志蛋白)的表達規(guī)律及其意義。
　　 實驗方法
　　 本實驗改進了前人的慢性膨脹材料壓迫模型,通過手術(shù)的方式植入壓迫材料,避免了植入過程中的直接損傷。于顯微鏡下,將大鼠胸7、8雙側(cè)椎弓根切斷,取下椎板,植入一種吸水膨脹材料,隨著壓迫物的膨脹,逐漸形成不同程度的慢性壓迫脊

2、髓損傷實驗動物模型。40只wistar大鼠隨機分為手術(shù)組30只,對照組10只。其中對照組進行同樣手術(shù),但不植入壓迫物。術(shù)后觀察,如大鼠出現(xiàn)雙下肢癱瘓癥狀,考慮為術(shù)中損傷所致,處死,不列入統(tǒng)計。術(shù)后青霉素抗炎治療5天。手術(shù)后在第1、3、7、14、28天通過BBB評分進行行為學功能評定,取自距壓迫邊緣5mm段脊髓組織,假手術(shù)組大鼠作為對照組,行病理學檢查及巢蛋白免疫組織化學染色,半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(reverse transcri

3、ption-polymerase chainreaction,RT-PCR)測定巢蛋白mRNA的表達,計算機圖像分析儀定量分析,同時測量壓迫段椎管直徑及緩膨脹材料侵占厚度。椎管侵占率=侵占厚度/壓迫段椎管直徑。
　　 實驗結(jié)果
　　 本實驗在建立大鼠慢性壓迫脊髓損傷模型后進行行為學觀察,組織學及病理學檢測,三者相符合。大鼠慢性壓迫脊髓損傷模型成立。Nestin表達陽性的樹狀突起延伸至灰質(zhì),在灰質(zhì)中的表達主要分布于神經(jīng)元附

4、近和血管周圍,損傷后第一天即開始表達,傷后1周達到高峰,2周開始下降,4周時幾乎無表達。模型建寺后24小時已檢測出巢蛋白mRNA表達,1周時達峰值,以后逐漸下降。
　　 實驗結(jié)論
　　 此模型較以往模型相比,具有制作簡單,損傷程度可調(diào)整,脊髓損傷能表現(xiàn)出不同的壓迫程度,可重復性強等優(yōu)點。為進一步研究脊髓慢性壓迫損傷病理機制奠定了基礎(chǔ)。病理學檢測結(jié)果顯示損傷3-7天以后受壓處脊髓組織液化壞死,瘢痕化并逐漸出現(xiàn)了神經(jīng)細胞數(shù)目

5、的減少和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的增生,而BBB評分和大鼠脊髓病理學改變在7天以后變化較快,提示早期減壓!巢蛋白為神經(jīng)干細胞前體細胞的標志蛋白,脊髓損傷后蛋白表達陽性的細胞在脊髓自身修復中可能發(fā)揮積極的作用。慢性脊髓損傷可引起巢蛋白及巢蛋白mRNA在脊髓白質(zhì)、灰質(zhì)和中央管室管膜細胞中的表達,并表現(xiàn)一定的變化規(guī)律,損傷后即有表達,1周達高峰,2周開始下降,因此,脊髓損傷后采取恰當?shù)臅r機行神經(jīng)干細胞移植,可能會有利于損傷的修復和功能重建。此外,損傷后如