褪黑素對大鼠慢性漸進性壓迫脊髓損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：(1)研究褪黑素對大鼠慢性漸進性壓迫脊髓損傷caspase-3表達和神經(jīng)細胞凋亡及大鼠脊髓神經(jīng)功能的影響。(2)研究大鼠慢性漸進性壓迫脊髓損傷caspase-3表達和神經(jīng)細胞凋亡的時空特征。 方法：120只健康雄性wister大鼠，后路壓迫建立漸進性壓迫損傷動物模型，隨機分為褪黑素治療組(A組)、甲基強的松龍治療組(B組)、生理鹽水對照組(C組)和無水乙醇組(D組)，(每組分別分為1天、4天、兒天、21天、35天、60天六

2、個時間點、每個時間點5只鼠)。于慢性漸進性壓迫脊髓損傷1 d、4 d、11 d、21 d、35 d、60 d取材，采用HE染色觀察慢性漸進性壓迫脊髓損傷脊髓組織病理變化，用免疫組織化學方法染色檢測caspase-3表達陽性細胞，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導生物素化dUTP缺口末端標記(TUNEL)技術(shù)觀察神經(jīng)細胞凋亡特點，并用改良的Tarlov評分法和斜板實驗觀察大鼠脊髓神經(jīng)功能變化情況。 結(jié)果：(1)caspase-3在大鼠慢性漸

3、進性壓迫脊髓損傷脊髓灰質(zhì)和白質(zhì)均有表達。C組與D組在損傷4d時表達呈增加趨勢，損傷11 d時明顯表達，21 d時達高峰，以后下降。A組和B組caspase-3表達較C組與D組低， 4d時有表達，11 d時達高峰，以后呈下降趨勢。A、B、C、D組分別行組間比較，經(jīng)統(tǒng)計學分析，A、C組間，A、D組間，B、C組間，B、D組間在損傷11 d、21d、35d比較差異具有非常顯著性統(tǒng)計學意義(p<0.01)，在4d、和60d比較具有顯著性統(tǒng)計學意義

4、(p<0.05)；A、B組間及C、D組間在各時間點相比差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。(2)C、D組大鼠慢性漸進性壓迫脊髓損傷4 d時在脊髓灰質(zhì)及白質(zhì)均可見少量散在標記陽性的凋亡細胞， 11d時凋亡指數(shù)明顯增加，陽性細胞主要分布在灰質(zhì)前、后角。21 d達高峰，高峰時主要發(fā)生在白質(zhì)中神經(jīng)膠質(zhì)細胞，以后呈下降趨勢。A組和B組神經(jīng)細胞凋亡指數(shù)較C組和D組低，4 d時也可見到標記陽性的凋亡細胞，高峰發(fā)生在損傷11d，以后明顯下降。A、B、C、

5、D組分別行組間比較，經(jīng)統(tǒng)計學分析，A、C組間，A、D組間，B、C組間，B、D組間在損傷11 d、21 d比較差異具有非常顯著性統(tǒng)計學意義(p<0.01)，在4d、35d、60d比較具有顯著性統(tǒng)計學意義(p<0.05)；A、 B組間及C、D組間在各時間點相比差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 (2)慢性漸進性壓迫脊髓損傷模型制成后脊髓神經(jīng)功能無明顯異常，在脊髓漸進壓迫損傷過程中，脊髓神經(jīng)功能逐漸下降：4 d時改良Tarlov評分和

6、斜板試驗角度開始降低，A組和B組改良的Tarlov評分和斜板試驗明顯好于C組和D組。 (3)H E染色光鏡下觀察脊髓組織病理學改變A組和B組明顯輕于C組和D組。 結(jié)論： (1)褪黑素能抑制大鼠慢性漸進性壓迫脊髓損傷caspase-3表達、減少神經(jīng)細胞凋亡，并能保護大鼠脊髓損傷神經(jīng)功能和促進其恢復。 (2)慢性漸進性壓迫脊髓損傷存在細胞凋亡現(xiàn)象，caspase-3參與慢性漸進性壓迫脊髓損傷細胞凋亡的調(diào)節(jié)