Hes1在SD大鼠脊髓發(fā)育不同階段及成年大鼠脊髓損傷后的表達(dá)規(guī)律研究.pdf

1、目的：（1）觀察Hesl在不同發(fā)育階段SD大鼠脊髓中的表達(dá)規(guī)律。（2）觀察Hes1在成年 SD大鼠脊髓損傷后不同時(shí)間的表達(dá)變化規(guī)律。（3）通過(guò)免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)觀察 Hes1陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞類型。
　　方法：（1）建立從胚胎期到成年期不同發(fā)育階段SD大鼠脊髓組織標(biāo)本庫(kù)：包括E15.5d（胚胎期15.5天），E18.5d（胚胎期18.5天），P0d（剛出生），P3d（出生3天），P7d（出生7天），P2w（出生2周），P4w（出生4周

2、），Adult（成年）等不同發(fā)育時(shí)期的SD大鼠脊髓。（2）使用 Allen法制作大鼠急性 SCI模型，并分別于損傷后6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d取脊髓組織。（3）RT-PCR檢測(cè)不同發(fā)育階段及成年大鼠脊髓損傷后不同時(shí)間Hes1 mRNA的表達(dá)變化。（4）western blot檢測(cè)不同發(fā)育階段及損傷后不同時(shí)間大鼠脊髓中 Hes1蛋白的表達(dá)變化。（5）使用免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)觀察Hes1在大鼠脊髓正常發(fā)育不同階段的表達(dá)情況及

3、陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)類型。
　　結(jié)果：（1） Hesl在所選取的不同發(fā)育階段的脊髓中均有表達(dá)，在大鼠脊髓發(fā)育過(guò)程中（E15.5、E18.5、P0、P3、P7、P2W）Hes1在 mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)顯著高于成年期（P<0.01）（2）成年大鼠脊髓損傷后3-5天 Hes1的表達(dá)在 mRNA水平和蛋白水平都有顯著性升高（P<0.05）。（3）免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，GFAP陽(yáng)性細(xì)胞在 E15.5d的大鼠脊髓中沒有觀察到，而在 P

4、0、P7、P2w期脊髓中出現(xiàn)；MBP陽(yáng)性細(xì)胞在胚胎期沒有觀察到，出現(xiàn)在 P7、P2W；β-Tubulin陽(yáng)性細(xì)胞在 E15.5、P0、P7、P2W都能檢測(cè)到；Nestin陽(yáng)性細(xì)胞出現(xiàn)在胚胎期，出生后（P7、P2W）檢測(cè)陰性。（4） Hes1主要在細(xì)胞核中表達(dá)，在 GFAP、MBP、β-Tubulin、Nestin陽(yáng)性細(xì)胞中都有表達(dá)。
　　結(jié)論：（1）Hesl在所選取的各個(gè)發(fā)育時(shí)期 SD大鼠脊髓中均表達(dá)，Hesl在 SD大鼠脊髓發(fā)育