抗水霉藥物的篩選及其制劑的應用效果研究.pdf

1、水霉病(Saprolegniasis)是水產(chǎn)養(yǎng)殖中一種由絲狀真菌引起的常見病害，是導致育苗失敗的主要因素之一，在成魚養(yǎng)殖中也可能發(fā)生水霉病，若不及時采取措施可能導致該病的大規(guī)模爆發(fā)，使養(yǎng)殖造成巨大損失。
　　 長期以來在生產(chǎn)中一直以“孔雀石綠”治療該病，并且有較好的療效。但是孔雀石綠具有高毒性、高殘留、高致痛和致畸性，2002年，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的193號公告以及NY5072-2002標準《無公害食品漁用藥物使用準則》中

2、明確規(guī)定在漁業(yè)領域禁用孔雀石綠。
　　 孔雀石綠的禁用使得在控制水霉病方面缺乏安全有效的替代藥物，生產(chǎn)上對于水霉病藥物的需求十分強烈。國內(nèi)外在水霉病藥物的開發(fā)方面研究不足，多年來均無重大進展。本實驗室經(jīng)過前一階段的研究，已經(jīng)得到了一種具有高效體外抗水霉活性的物質(zhì)--化合物X，為了進一步改進其性能，本研究從生物防治和化學結構改造兩個方面入手，通過建立藥物篩選模型，初篩、復配、安全性評價、臨床藥效評價等過程，研制出了一種替代“孔雀石

3、綠”的新型藥物，具有一定的創(chuàng)新性和推廣價值，在實際的生產(chǎn)應用中取得了良好的應用效果。解決了水產(chǎn)養(yǎng)殖動物水霉病等真菌性疾病防治藥物空白的現(xiàn)狀，在一定程度上為解決“孔雀石綠”的濫用，保障水產(chǎn)品的質(zhì)量安全和人類的健康發(fā)揮了重要的作用。
　　 本研究論文共分為四章。第一章：抗水霉藥物體外藥效評價方法的比較；第二章：抗水霉藥物的篩選及其后抑菌效應；第三章：抗水霉藥物的復配及其體外藥效評價；第四章：抗水霉藥物的安全性評價及其臨床應用效果。具

4、體內(nèi)容如下：
　　 第一章：為了尋找一種穩(wěn)定性高、方便快捷的體外藥物篩選及體外藥效評價方法，方便各藥物篩選結果的比較，而且為各藥物的體外藥效評價提供統(tǒng)一、可靠的方法，利用常用的體外抗真菌藥敏試驗的方法，即液體稀釋法與瓊脂稀釋法進行了三種藥物對本實驗室保藏的水霉菌株XJ(本實驗室保藏水霉菌株)的體外抑菌效果，這三種藥物包括中草藥五倍子粉末、五水硫酸銅、孔雀石綠，文獻報道及生產(chǎn)實踐中均用到這三種藥物來防治水霉病。通過研究兩種不同的體

5、外藥效評價方法對水霉菌絲和孢子的MIC(最小抑菌濃度)值，可以得出如下結論：藥物對水霉菌絲的MIC值均大于對其孢子的MIC值，在藥物初篩時選擇評價藥物對菌絲的MIC值，由于液體稀釋法與瓊脂稀釋法相比具有更低的MIC值，故采用液體稀釋法進行初篩，以保留更多的藥物進入下一步的復篩及體外藥效評價。從而得到了可靠的藥物篩選方法。
　　 第二章：從大量的文獻資料和應用實例中廣泛搜集具有潛在抗霉菌活性的物質(zhì)(化合物或單質(zhì))，建立待篩選的藥物

6、庫，將藥物庫中的藥物分門別類的進行初步篩選，利用大量液體稀釋法進行初篩，對水霉菌絲的最小抑菌濃度在最高濃度以上的藥物進行舍棄，通過查找相關資料，進一步考慮藥物的理化性質(zhì)，水溶性，毒副作用及使用成木等因素，將毒性大，價格高的藥物進行舍棄。將硫酸銅、硫酸鋁鉀、異噻唑啉酮、磺基水楊酸、尼泊金乙酯、MBT(二硫氰基甲烷)作為復篩藥物進行體外藥效評價。通過兩種方法的體外藥效評價，得到了上述藥物對水霉菌絲及孢子的體外作用效果。同時研究了兩種優(yōu)良防霉

7、劑的后抗真菌效應。
　　 第三章：為了考察上述幾種化合物與化合物X的聯(lián)合使用效果，分別評價了異噻唑啉酮、磺基水楊酸、尼泊金乙酯、MBT與化合物X配合使用后對水霉菌的聯(lián)合抑菌作用，選擇其中與化合物X具有協(xié)同作用的化合物進行了不同比例的配比，確定了兩者之間的最佳配比為5:2，以該比例將兩種藥物混合后配以輔料氣相二氧化硅，制成了一種新的抗水霉藥物，即化合物X制劑。測定了化合物X制劑對水霉菌的體外作用效果，其對水霉孢子的MIC值為1pp

8、m，其對水霉菌絲的MIC為5ppm，為了使生產(chǎn)中的用藥成本最低，建議化合物X制劑的推薦浸泡用量為5mg/L。
　　 第四章：為了驗證化合物X制劑在實際生產(chǎn)中的應用效果，進行了化合物X制劑的安全性評價及臨床應用效果研究，化合物X制劑對大宗淡水養(yǎng)殖魚類的安全濃度在5mg/L以上，對魚卵在50mg/L以內(nèi)是安全的，對蝦蟹類卵在25mg/L以內(nèi)是安全的。臨床應用研究表明，其在5ppm以上時可以顯著降低水霉病的發(fā)病率(p<0.05)，在5