王不留行、桃仁和郁金中抑制FXa活性成分研究.pdf

1、血栓性疾病嚴重危害人類健康，而傳統(tǒng)抗凝藥又存在許多局限。新一代抗凝藥的研發(fā)成為全球抗凝藥研究的熱點?，F(xiàn)代研究表明顯著抑制活化的凝血因子Xa(FXa)可有效抗凝而不影響基本的止血，這使FXa抑制劑成為理想的抗凝藥物。抑制FXa的新結(jié)構(gòu)類型活性化合物的發(fā)現(xiàn)對新一代抗凝藥的研究至關(guān)重要。
　　活血化瘀類中藥用于治療血瘀證具有悠久的歷史，現(xiàn)代藥理研究也表明，部分活血化瘀中藥具有一定的抗凝活性。課題組前期對常用活血化瘀藥抑制FXa的活性進行

2、了篩選，結(jié)果顯示王不留行、桃仁和郁金85％醇提取物對FXa具有較好的抑制活性。本文對這三種中藥抑制FXa的活性部位進行了分離純化，以期找到活性成分，為研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新穎抗凝藥物提供科學(xué)依據(jù)，奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　主要研究內(nèi)容如下:
　　1.中藥王不留行中抑制FXa活性成分研究
　　利用各種柱色譜技術(shù)從王不留行抑制FXa的活性部位中分離純化了13個化合物，利用1H-NMR、13C-NMR、MS、BC、DEPT等波譜

3、技術(shù)分別鑒定為α-波甾醇、豆甾-7，22-二烯-3-酮、豆甾-1，5-二烯-3-醇、Ⅳ-(3-甲氧基-4-羥基苯乙基)正二十四烷酸酰胺、Ⅳ-（3，4-二羥基苯乙基）正二十四烷酸酰胺、絲石竹酸、16-羥基絲石竹酸、原兒茶酸、王不留行環(huán)肽A、王不留行環(huán)肽B、腺苷、牡蠣素和pinnatifinE，其中化合物N-(3-甲氧基-4-羥基苯乙基)正二十四烷酸酰胺、N-(3，4-二羥基苯乙基)正二十四烷酸酰胺和pinnatifinE為3個新化合物。對

4、各單體化合物進行了FXa抑制率測定，IC50分別為279.55，286.98，307.54，210.57，222.67，165.23，293.67，654.65，198.18，249.30，380.71，221.83，278.17μmol/L，其中化合物絲石竹酸和王不留行環(huán)肽A對FXa具有一定的抑制活性。
　　2.中藥桃仁中抑制FXa活性成分研究
　　利用各種柱色譜技術(shù)從桃仁抑制FXa的活性部位中分離純化了10個化合物，利用

5、1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜技術(shù)分別鑒定為9-十八碳烯酸-2'，3'-二羥基丙酯、胡蘿卜苷、扁桃酰胺、苯甲酸、2-羥基-9-十八碳烯酸、正十七烷酸、9-十八碳烯酸甲酯、對羥基苯甲酸、正十六烷酸、苦杏仁苷。對各單體化合物進行了FXa抑制率測定，IC50分別為265.80，187.25，565.46，850.54，454.06，303.52，440.56，691.75，373.58，220.12μmol/L，其中化合物胡蘿卜苷具

6、有一定的FXa抑制活性。
　　3.中藥郁金中抑制FXa活性成分研究
　　利用各種柱色譜技術(shù)從郁金抑制FXa的活性部位中分離純化了10個化合物，利用1H-NMR、13C-NMR、MS等波譜技術(shù)分別鑒定為桂莪術(shù)內(nèi)酯、a-epoxide、正十六烷酸、鄰苯二甲酸二丁酯、莪術(shù)烯醇、二十二烷醇、甘油三亞油酸酯、β-谷甾醇、5-羥甲基-糠醛、雙[5-甲酰基糠基]醚。對各單體化合物進行了FXa抑制率測定，IC50分別為287.31，233.

7、78，303.55，376.83，402.31，301.20，202.39，255.90，173.61，166.88μmol/L，其中化合物5-羥甲基-糠醛和雙[5-甲?；坊鵠醚具有一定的FXa抑制活性。
　　4.FXa抑制劑-甘草次酸與天然抗血小板聚集活性成分的協(xié)同抗凝血作用研究
　　體外采用試劑盒法測定了FXa抑制劑甘草次酸與天然抗血小板聚集活性成分對APTT、TT的延長作用，按Berenbaum法公式評價兩藥合用時效

8、應(yīng)，其中甘草次酸和川芎嗪合用時Y值小于1，表明甘草次酸與川芎嗪體外具有協(xié)同抗凝作用。體內(nèi)采用玻片法證明甘草次酸與川芎嗪聯(lián)合用藥比單用顯著延長大鼠凝血時間，斷尾法證明甘草次酸和川芎嗪聯(lián)合用藥不顯著延長大鼠出血時間，不會引起體內(nèi)大出血。因此，甘草次酸和川芎嗪聯(lián)合用藥能增強彼此的抗凝作用且不會增加出血風(fēng)險。
　　綜上，本文研究了王不留行、桃仁和郁金的FXa抑制活性，對主要活性部位進行了分離純化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物絲石竹酸、王不留行環(huán)肽A、胡