中藥王不留行對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞核蛋白質(zhì)組學(xué)的影響.pdf

1、深入研究奶牛泌乳功能的調(diào)控對(duì)解決我國(guó)奶牛業(yè)存在的產(chǎn)奶量低、乳品質(zhì)低等制約我國(guó)奶牛業(yè)發(fā)展的問(wèn)題具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際意義。傳統(tǒng)中草藥王不留行作為重要的催乳中藥之一，在臨床和畜牧業(yè)生產(chǎn)中得到廣泛的應(yīng)用。其可能具有雌激素樣活性，可激活泌乳信號(hào)途徑，進(jìn)而通過(guò)調(diào)控乳蛋白、乳糖和乳脂等的合成而促進(jìn)泌乳。但王不留行促進(jìn)泌乳性能的作用機(jī)理尚不清楚，尤其是王不留行在奶牛乳腺組織中調(diào)控泌乳的分子機(jī)理尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本研究應(yīng)用CASY細(xì)胞分析儀

2、檢測(cè)了不同作用時(shí)間下王不留行提取液對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞活力的影響；從蛋白質(zhì)組學(xué)方面考慮王不留行提取液對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞核基質(zhì)蛋白質(zhì)的影響，建立奶牛乳腺上皮細(xì)胞核基質(zhì)蛋白雙向電泳方法，并且應(yīng)用雙向電泳(2-DE)結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)鑒定王不留行提取液對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞核基質(zhì)蛋白的差異影響；應(yīng)用熒光定量PCR驗(yàn)證差異蛋白在不同泌乳水平奶牛乳腺組織中的表達(dá)情況，從而深入探索其催乳機(jī)理。結(jié)果表明：①中草藥王不留行提取

3、液對(duì)原代培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞的增殖和細(xì)胞活力提高均顯著(P<0.05)，確定了王不留行提取液的體外最佳作用時(shí)間為24 h，明顯促進(jìn)奶牛乳腺上皮細(xì)胞活力的增加，并增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力；②建立和優(yōu)化了乳腺上皮細(xì)胞核基質(zhì)蛋白雙向電泳方法，獲得蛋白斑點(diǎn)數(shù)多，重復(fù)性好的雙向電泳圖譜，為后續(xù)乳腺上皮細(xì)胞核蛋白質(zhì)組研究提供了方法性基礎(chǔ)；③通過(guò)添加中草藥王不留行提取液作用于奶牛乳腺上皮細(xì)胞，應(yīng)用雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)分析，成功篩選并鑒定了具有重要意義的5

4、種差異細(xì)胞核基質(zhì)蛋白，分別為：ethylmalonicencephalopathy1(ETHE1)，vesicle amine transport protein1 homolog(VAT1)，parkinson diseaseprotein7 homolog(Protein DJ-1)，proteasome subunit alpha type-2(PSMA2)和SUMO-activatingenzyme subunit1(SAE1)

5、，并且通過(guò)熒光定量RT-PCR的方法鑒定了其5個(gè)基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)差異情況；④通過(guò)熒光定量PCR的方法驗(yàn)證其5個(gè)基因在不同泌乳水平奶牛乳腺組織中表達(dá)的差異性，表明這5個(gè)基因都可能與奶牛乳腺乳蛋白及乳脂合成具有潛在的關(guān)聯(lián)。以上試驗(yàn)研究結(jié)果表明，王不留行可顯著提高乳腺上皮細(xì)胞的增殖和泌乳能力。首次從蛋白質(zhì)組學(xué)方面闡明了王不留行體外作用于奶牛乳腺上皮細(xì)胞的作用機(jī)理。揭示了王不留行促進(jìn)乳腺泌乳和增殖的蛋白質(zhì)組學(xué)基礎(chǔ)，但是這5個(gè)差異蛋白的具體