異常剪接組織因子在初治急性早幼粒細(xì)胞白血病患者治療前和緩解后mRNA水平的變化及意義.pdf

1、目的:
　　急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）是急性粒細(xì)胞白血?。ˋML）中的一個(gè)特殊亞型，在早期常伴有嚴(yán)重的凝血異常，是APL患者早期死亡的主要原因。組織因子在凝血過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。異常剪接組織因子（alternatively spliced tissue factor, asTF）作為組織因子的一種可溶性剪接體，其在凝血過(guò)程中發(fā)揮的作用尚有爭(zhēng)議，且其與腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及腫瘤新生血管形成有著一定的關(guān)系，目前有關(guān)APL患者中的a

2、sTF表達(dá)未見(jiàn)報(bào)道。
　　本研究旨在建立asTF表達(dá)量的檢測(cè)方法，并對(duì)初治APL患者asTF進(jìn)行檢測(cè)，比較初診APL患者和緩解（CR）后APL患者asTF的mRNA水平的表達(dá)情況，并探討其臨床意義。
　　方法:
　?。?）采用Primer Express2.0設(shè)計(jì)asTF引物，通過(guò)在不同溫度下對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株 NB4 asTF及內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)，建立熒光染料實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)asTF表達(dá)量的方法，并對(duì)

3、其進(jìn)行驗(yàn)證。
　?。?）作為分析 asTF mRNA表達(dá)水平與 APL患者外周血白細(xì)胞數(shù)的關(guān)系：Spearman’s相關(guān)性分析asTF與APL患者白細(xì)胞數(shù)之間的相關(guān)性。采用熒光染料實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)動(dòng)態(tài)檢測(cè)33例APL患者治療前和緩解后外周血asTF mRNA水平表達(dá)情況，并與15例非APL急性粒細(xì)胞白血病患者及15例正常健康者外周血asTF mRNA表達(dá)水平進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果:
　?。?）成功

4、建立了采用qPCR技術(shù)檢測(cè)asTF mRNA方法，并對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)了用該引物檢測(cè)asTF表達(dá)量的可行性。
　?。?）asTF mRNA表達(dá)水平與APL患者外周血白細(xì)胞的關(guān)系：asTF與APL患者外周血白細(xì)胞無(wú)相關(guān)性（P>0.05），排除了白細(xì)胞數(shù)對(duì)asTF表達(dá)量的影響。asTF mRNA表達(dá)水平：APL患者緩解后asTF mRNA水平表達(dá)高于治療前（P<0.05），正常健康者和非APL的AML患者asTF表達(dá)量均高于APL患者

5、治療前（P<0.01），但非APL的AML患者與正常健康者之間asTF表達(dá)量未見(jiàn)明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論:
　?。?）成功建立了qPCR技術(shù)檢測(cè)人外周血asTF mRNA的方法。
　?。?）asTF在APL患者緩解后的表達(dá)高于治療前，正常健康者asTF表達(dá)明顯高于治療前APL患者，而緩解后總TF mRNA水平較治療前處于低水平，提示asTF在APL患者中凝血作用較flTF低，并推測(cè)PML/RARa可能是打破