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1、Foxo作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子家族中的一員,可參與多條重要的信號(hào)通路,介導(dǎo)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá),從而在細(xì)胞分化、代謝和細(xì)胞凋亡等多個(gè)重要的生物進(jìn)程中發(fā)揮作用。同時(shí),F(xiàn)oxo是IIS(Insulin/IGF)信號(hào)通路的關(guān)鍵分子,受到上游Insulin信號(hào)級(jí)聯(lián)通路的磷酸化調(diào)節(jié),介導(dǎo)下游靶基因的表達(dá),參與生物衰老的過程。關(guān)于Foxo調(diào)節(jié)壽命的上游信號(hào)通路研究已有許多,但其轉(zhuǎn)錄調(diào)控下游靶基因的機(jī)制還不清楚。本文利用模式生物果蠅,篩選Foxo轉(zhuǎn)錄調(diào)控的
2、基因,研究Foxo調(diào)控壽命的具體機(jī)制。
在GAL4/UAS雙元表達(dá)系統(tǒng)基礎(chǔ)上,利用RU486誘導(dǎo)dFoxo基因在果蠅成蟲脂肪中特異性過表達(dá),將其與野生型果蠅3號(hào)染色體上30株不同基因片段缺失品系果蠅雜交進(jìn)行遺傳篩選,通過Kaplan-Meier生存曲線與野生背景Foxo過表達(dá)的果蠅壽命進(jìn)行比較,根據(jù)Log-Rank分析鑒定Foxo的下游靶基因所在的基因片段缺失品系。選擇上述實(shí)驗(yàn)中影響dFoxo壽命延長(zhǎng)的基因片段缺失的果蠅進(jìn)行重
3、復(fù)性試驗(yàn),并進(jìn)一步深入篩選基因缺失片段中可能存在的具體基因。
在野生型果蠅成蟲脂肪中過表達(dá)Foxo可以延長(zhǎng)果蠅壽命,不同基因片段缺失品系3486、6962,7633、7634、7647、7675、7676、7731、7739、8029、8923、8964、9002、9090、9204、9482、9497、9983、24373、24970、24980、24990、24993、25011、25019、25126、26846、268
4、48、27342、27580果蠅與過表達(dá)Foxo果蠅雜交后,發(fā)現(xiàn)其中基因片段缺失品系7633、6962、7676、7647、8964、9482、27362和24990的后代雄果蠅均可抑制dFoxo過表達(dá)引起的壽命延長(zhǎng)的表型,而雌果蠅除7647與9482以外也有同樣的表型,其中以24990與7633最為明顯;而24993、25011和27580則相反,可在其基礎(chǔ)上延長(zhǎng)果蠅壽命;3684、7634、7675、7731、7739、8029、8
5、923、9002、9090、9204、9497、9983、24373、24970、24980、26848、25019、25126和26846則對(duì)dFoxo過表達(dá)引起的壽命延長(zhǎng)沒有任何影響。繼續(xù)篩選基因片段缺失品系24990,將其中包含的10株小基因缺失片段品系6164、7645、7646、7647、7932、7970、7972、7974、9087、25690進(jìn)行雜交篩選,其中9087、7970、7974和25690可以明顯抑制dFoxo
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