共振散射光譜法用于牛血清白蛋白的痕量檢測(cè).pdf

1、共振散射光譜法用于牛血清白蛋白的痕量檢測(cè)重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文(學(xué)術(shù)學(xué)位)學(xué)生姓名：周大學(xué)指導(dǎo)教師：宋仲容教授專業(yè)：化學(xué)學(xué)科門類：理學(xué)重慶大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院二O一二年四月重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要摘要蛋白質(zhì)是細(xì)胞的重要組成物，在生命現(xiàn)象和生命過程中起著至關(guān)重要的作用。對(duì)蛋白質(zhì)的定量分析檢測(cè)在藥學(xué)、生物化學(xué)、生物技術(shù)、臨床醫(yī)學(xué)及食品營養(yǎng)學(xué)領(lǐng)域有著十分重要的現(xiàn)實(shí)意義，其研究成果對(duì)解釋蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及蛋白質(zhì)與物質(zhì)或藥物的作用機(jī)理具

2、有指導(dǎo)意義。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)分析檢測(cè)方法主要有凱式定氮法、考馬斯亮藍(lán)法、分光光度法、熒光光度法、化學(xué)發(fā)光法、近紅外反射光譜法、雙縮脲法等。但這些分析方法大都存在靈敏度較低、選擇性差、穩(wěn)定性弱及操作繁瑣費(fèi)時(shí)等局限。共振散射光譜法作為新興的光譜分析技術(shù)，因其靈敏度高、選擇性好、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)而得到廣泛應(yīng)用，本文研究了共振散射光譜法用于痕量蛋白質(zhì)的檢測(cè)，論文主要研究內(nèi)容包括：①酸性鉻蘭K牛血清蛋白OP體系的共振散射、二級(jí)散射和倍頻散射光譜研究在P

3、H32的鄰苯二甲酸氫鉀鹽酸緩沖液中，酸性格蘭K可離解而以帶負(fù)電荷的陰離子存在，而在此條件下牛血清蛋白質(zhì)(BSA)處于其等電點(diǎn)(PI)之下，則以帶多個(gè)正電荷的陽離子形式存在，兩者可借助靜電引力、氫鍵作用及疏水作用力而結(jié)合形成締合物微粒。當(dāng)溶液中存在非離子表面活性劑OP時(shí)，OP可與締合微粒通過分子間作用力產(chǎn)生吸附結(jié)合，增大微粒粒徑。此時(shí)將引起體系共振散射(RLS)、二級(jí)散射(SOS)和倍頻散射(FDS)的顯著增強(qiáng)，其最大RLS，SOS，F(xiàn)D

4、S波長分別位于420nm、680nm和340rim。三種散射增強(qiáng)(刖也Msos和AIFDs)在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)濃度成正比，方法線性范圍分別是RLS為064mg／L、SOS為O58mg／L：FDS為0—58mg／L；檢出限分別為1233ttg／L(aLS)、112199／L(SOS)、1149ttg／L(FDS)，據(jù)此建立了靈敏的測(cè)定BSA的共振線性(RLS)和共振非線性光散射(RNLS)分析法。研究了反應(yīng)體系的RLS、SOS和FDS光

5、譜特征，并以RLS法考察了體系介質(zhì)條件選擇、PH值、共振探針用量、非離子表面活性劑OP濃度及共存物質(zhì)等因素對(duì)散射體系的影響。結(jié)果表明方法選擇性好，靈敏度高，操作簡便，可用于血清、卵清和尿樣中蛋白質(zhì)的測(cè)定，回收率為9944％10395％。②甲苯咪唑共振散射法用于蛋白質(zhì)的痕量檢測(cè)建立血液中痕量蛋白的共振散射(RLS)光譜分析方法。鹽酸一甲苯咪唑(MEB)牛血清白蛋白(BSA)體系的最大共振散射(RLS)，二級(jí)散射(sos)，倍頻散射(FDS