菜蛾盤絨繭蜂熱激蛋白基因的克隆及表達研究.pdf

1、熱激蛋白(heat shock proteins，HSPs)又稱熱休克蛋白，是生物體在受熱或其他因素作用下產生的蛋白質分子，與生物的發(fā)育和抗逆密切相關。
　　 本研究克隆了菜蛾盤絨繭蜂Cotesia vestalis體內4個hsps基因，并研究了菜蛾盤絨繭蜂hsps與發(fā)育的關系以及高溫脅迫下菜蛾盤絨繭蜂及其寄主小菜蛾Plutella xylostella的hsps表達模式?，F(xiàn)將研究結果總結如下:
　　 1)菜蛾盤絨繭蜂h

2、sps的克隆及其序列分析
　　 通過數據庫檢索、PCR、RT-PCR、RACE等技術和手段，共獲得菜蛾盤絨繭蜂4個hsps的cDNA和基因組DNA序列，涉及3個熱激蛋白家族。
　　 Cvhsp40的cDNA全長1473bp，其中包含長度為1068bp的ORF，可翻譯成長度為355個氨基酸的蛋白質，其理論分子量為39.1kDa，基因組序列內不含內含子。Cvhsp70的cDNA全長2151bp，其中包含長度為1938bp的O

3、RF，可翻譯成長度為645個氨基酸的蛋白質，其理論分子量為70.1kDa，基因組序列內不含內含子。Cvhsc70的cDNA全長2327bp，其中包含長度為1956bp的ORF，可翻譯成長度為651個氨基酸的蛋白質，其理論分子量為71.2kDa，基因組序列內含有兩個內含子。Cvhsp90的cDNA全長2663bp，其中包含長度為2172bp的ORF，可翻譯成長度為723個氨基酸的蛋白質，其理論分子量為83.3kDa，基因組序列內不含內含子

4、。
　　 2)菜蛾盤絨繭蜂不同發(fā)育時期hsps的表達規(guī)律
　　 通過特異性引物和熒光定量PCR方法分別檢測了菜蛾盤絨繭蜂4個hsps在不同發(fā)育時期（1齡末幼蜂、2齡初幼蜂、2齡末幼蜂、3齡幼蜂（結繭后1天）、蛹（結繭后4天）、初羽化雌蜂和初羽化雄蜂）的表達規(guī)律。結果表明Cvhsp40和Cvhsc70的表達規(guī)律是隨著發(fā)育的進程先降低再升高，Cvhsp70的表達規(guī)律是隨著發(fā)育的進程先升高再降低，Cvhsp90的表達規(guī)律是隨著

5、發(fā)育的進程先降低再升高再降低。同時，Cvhsp40和Cvhsc70在雌成蟲中表達量最高，Cvhsp70在蛹中表達量最高，Cvhsp90在1齡幼蟲和3齡幼蟲中表達量最高。
　　 3)高溫脅迫條件下菜蛾盤絨繭蜂及其寄主小菜蛾hsps的表達模式
　　 通過特異性引物和熒光定量PCR方法分別檢測了菜蛾盤絨繭蜂1齡幼蜂、2齡初幼蜂、2齡末幼蜂、3齡幼蜂（結繭后1天）、蛹（結繭后4天）、初羽化雌蜂和初羽化雄蜂以及寄主小菜蛾的4個hs

6、ps在高溫脅迫（27～42℃處理1h，24℃恢復1h）下表達規(guī)律，24℃放置2h作為對照。結果表明，熱脅迫條件下不同發(fā)育時期的菜蛾盤絨繭蜂hsps表達模式不一樣，總體趨勢是隨溫度上升hsps表達量上升，但是在菜蛾盤絨繭蜂2齡初幼蜂中hsp40和hsp90的表達量在32℃處理顯著下降;hsc70的表達量在27℃、32℃處理顯著低于在24℃對照處理，這可能與寄生蜂和寄主間相互作用相關。
　　 在24℃條件下，菜蛾盤絨繭蜂的寄生可以誘

7、導小菜蛾4齡初幼蟲hsc70和4齡中小菜蛾幼蟲hsp70、hsc70、hsp90的表達量的升高。而在高溫和寄生的同時作用時，hsps的表達模式變化較大，被寄生小菜蛾4齡初幼蟲hsp40、hsp70，以及4齡中幼蟲hsp40的Tmax（誘導hsps表達量達到最高值的溫度）比在相對應的未寄生小菜蛾中高5℃;其他齡期未寄生與被寄生小菜蛾hsps的Tmax基本一致，說明了在寄生蜂發(fā)育的初期和中期，寄生能誘導寄主hsps表達并引起寄主抗熱性增強，