代表性內(nèi)分泌干擾物致小鼠性別發(fā)育和性別穩(wěn)定異常的作用機(jī)制.pdf

1、博士學(xué)位論文代表性內(nèi)分泌干擾物致小鼠性別發(fā)育和性別穩(wěn)定異常的作用機(jī)制MechanismsunderlyingtheAbnormalityofSexualDeveIopmentandStabiIityinMOuseInducedbyRepresentatiVeEndocrneDisruptingChemicaIs學(xué)號(hào)：!!Q!晝Q三Q指導(dǎo)教師：國王登云型夔學(xué)科、專業(yè)：生塑絲工答辯日期：2Q!墨生!至旦!Q旦大連理工大學(xué)DaliaIlU11

2、iVers時(shí)ofTecllIlology大連理工大學(xué)博士學(xué)位論文摘要內(nèi)分泌干擾物(Endo嘶nedismp血gcheIIlicals，EDCs)廣泛存在于空氣、土壤、水體等環(huán)境介質(zhì)中，能夠干擾動(dòng)物性別發(fā)育過程及性別穩(wěn)定維持從而造成生物種群的性別比例失衡、生物個(gè)體性早熟、性反轉(zhuǎn)等性別發(fā)育異常現(xiàn)象。最近研究發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)物的性別發(fā)育過程中，除性染色體上的關(guān)鍵基因，位于常染色體上一系列轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)分子的調(diào)控對雙潛能性腺的分化具有關(guān)鍵作用，性成

3、熟后諸多性別決定基因也參與維系性腺的正常功能和性別穩(wěn)定過程。因此，基于常染色體上的性別決定基因研究EDCs對哺乳動(dòng)物性別發(fā)育過程和性別穩(wěn)定維持的基因調(diào)控通路的影響，對闡明其生殖和發(fā)育毒性機(jī)理具有重要意義。本論文以抗雌激素效應(yīng)化合物他莫昔芬(T鋤loxifen，TAM)為模型化學(xué)物，研究其對小鼠性別發(fā)育和性別穩(wěn)定維持過程常染色體上關(guān)鍵調(diào)控基因的影響，并基于這一研究結(jié)果進(jìn)一步選擇兩種典型環(huán)境內(nèi)分泌干擾物一雙酚A(BisphenolA，BPA

4、)和三丁基錫(T抽u哆ltin，TBT)，探討其干擾小鼠性別發(fā)育過程的分子調(diào)控機(jī)理。本論文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：1胚胎期暴露T舢Ⅵ對小鼠性別決定基因的影響。ICR孕鼠在妊娠第105天(dayspostcoit哪，dpc)腹腔注射1mg／kgbwTAM，135dpc取胎鼠生殖嵴，采用實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Realtimereverse廿aIlScriptionpolyme娜ecllain陀action，ReaJtimeRT-PCR

5、)、整胚原位雜交對性別決定基因表達(dá)進(jìn)行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)性別決定關(guān)鍵期暴露T—W能夠誘導(dǎo)雌性生殖嵴中血小板源生長因子受體噸(Platelet也而vedgrowtllfactorreceptor-a，尸叔步a)過表達(dá)且表達(dá)模式與雄性生殖嵴類似，表明n蝴能夠誘導(dǎo)睪丸特異性體腔血管生成。同時(shí)刪顯著上調(diào)小鼠雌性生殖嵴中睪丸特異性轉(zhuǎn)錄因子S砂相關(guān)基因9(SR-Y-related陽ⅥGboxgene9，S缸9)表達(dá)，但下調(diào)卵巢決定關(guān)鍵因子一叉頭狀轉(zhuǎn)錄因

6、子基因2(Forkllead／晰ngedhelix衄1scription矗擾torgene2，刪)表達(dá)。SOX9和FOⅪ。2蛋白表達(dá)水平的變化和基因表達(dá)變化一致。小鼠胚胎生殖嵴體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)TJ氣M能夠顯著上調(diào)雌性生殖嵴中蚴a和成纖維細(xì)胞生長因子9(Fibroblastgrowtllfactor-9，F(xiàn)g矽)表達(dá)，并降低雄性生殖嵴中疋汐的表達(dá)。雌二醇和睪酮的比值∞m在TAM暴露組中也顯著降低。結(jié)果提示n州抑制小鼠雌性生殖嵴常染色