百草枯中毒大鼠組織中ICAM-1與TNF-A的表達(dá)及5-氨基水楊酸的治療干預(yù)研究.pdf

1、目的：百草枯(paraquat，PQ)，是世界范圍內(nèi)廣泛使用的一種快速滅生性除草劑。其在我國(guó)農(nóng)業(yè)領(lǐng)域里亦廣泛應(yīng)，故一直以來PQ中毒病例在我國(guó)屢見不鮮。PQ對(duì)人體毒性較強(qiáng)，僅微量中毒便可致死，且目前尚無任何特效解毒藥，臨床病死率極高，如今已被20多個(gè)國(guó)家明令禁止或嚴(yán)格限制使用。目前PQ中毒引起腎臟損傷的機(jī)制尚未完全明確。本實(shí)驗(yàn)通過建立PQ染毒大鼠模型，測(cè)定其血清超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)活力以及谷胱甘

2、肽(L-Glutathione，GSH)、丙二醛(MaleicDialdehyde，MDA)含量，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法觀察細(xì)胞間粘附因子-1(ICAM-1)及腫瘤壞死因子-a(TNF-a)在PQ染毒大鼠腎組織中的表達(dá)，并在此基礎(chǔ)上，通過應(yīng)用5-氨基水楊酸(5-Aminosalicy acid，5-ASA)觀察上述指標(biāo)的變化規(guī)律，從而進(jìn)一步探討PQ中毒對(duì)腎臟損傷的機(jī)制以及5-ASA對(duì)百草枯染毒大鼠腎損傷的保護(hù)機(jī)制。
　　方法：選

3、擇健康的成年雄性Wistar大鼠80只，體重在200-230g之間。飼養(yǎng)室室溫控制在22-26℃之間，進(jìn)行短期實(shí)驗(yàn)性飼養(yǎng)，后將大鼠隨機(jī)分為4組：①對(duì)照組(A組)20只；②染毒組(B組)20只；③；染毒+治療組(C組)20只；④單純治療組(D組)20只。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天早晨8點(diǎn)，B、C兩組分別給予80mg/kg的PQ灌胃染毒，A、D兩組分別給予相同體積的雙蒸水胃內(nèi)灌注。2小時(shí)后，C、D兩組分別給予75mg/kg的5-ASA胃內(nèi)灌注，A、B兩組分別

4、給予相同體積的雙蒸水胃內(nèi)灌注。自第2天上午，C、D兩組分別給予75mg/kg的5-ASA胃內(nèi)灌注，A、B兩組分別給予相同體積的雙蒸水胃內(nèi)灌注，每日1次，最長(zhǎng)用藥時(shí)間為7天。A、B、C、D各組于實(shí)驗(yàn)后1d、3d、7d、14d分別取5只大鼠，給予10％水合氯醛0.35mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉后開腹，從髂總靜脈取血3-4ml，高速離心10min(4000r/h)，取上層血清測(cè)定SOD活力以及GSH、MDA含量；迅速留取一側(cè)腎臟進(jìn)行HE染色，鏡

5、下觀察超微組織結(jié)構(gòu)，并行免疫組織化學(xué)染色，觀察ICAM-1及TNF-a在大鼠腎組織中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1大鼠臨床表現(xiàn)：A組及D組大鼠未觀察到明顯中毒表現(xiàn)。B組大鼠在染毒后2小時(shí)之內(nèi)即出現(xiàn)體毛直立，精神差，煩躁，厭食水等中毒表現(xiàn)；之后多數(shù)大鼠尿量減少，體重減輕，部分大鼠出現(xiàn)呼吸困難、稀便、口鼻可見血性分泌物。C組大鼠經(jīng)5-ASA治療后，中毒表現(xiàn)較B組為減輕，僅偶見呼吸困難癥狀，體重下降不明顯，稀便及口鼻、眼周血性分

6、泌物少見。
　　2大鼠血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：
　?、貰組大鼠血清SOD活力在染毒后1d最低，至7d時(shí)間點(diǎn)仍明顯低于A組(P＜0.01)，后逐漸升高，至14d后與A組相比不再具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。C組大鼠血清SOD活力在染毒后的1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)均較B組明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；僅1d、3d時(shí)間點(diǎn)較A組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。D組與A組比較，SOD活力在染毒后的1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)均不具有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義(P＜0.01)。
　?、贐組大鼠血清GSH含量在染毒后的1d為最低，至3d時(shí)間點(diǎn)仍明顯低于A組(P＜0.01)，后逐漸升高，至7d后與A組相比不再具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。C組大鼠血清GSH含量在染毒后的1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)均較B組明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；所有時(shí)間點(diǎn)較A組均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。D組與A組比較，GSH含量在染毒后的1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)

8、。
　?、跙組大鼠血清MDA含量在染毒后的1d為最高，至7d時(shí)間點(diǎn)仍明顯高于A組(P＜0.01)，后逐漸下降，至14d后與A組相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。C組大鼠血清MDA含量在染毒后的1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)均較B組明顯降低(P＜0.05)，僅1d、3d時(shí)間點(diǎn)較A組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。D組與A組比較，MDA含量在染毒后的1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3實(shí)驗(yàn)大鼠腎組織形態(tài)

9、學(xué)變化：
　?、偃庋塾^察：A組大鼠腎臟色澤紅潤(rùn)，被膜無腫脹；B組大鼠腎臟色澤深暗，被膜腫脹；C組大鼠腎臟與B組相比顏色較紅，被膜腫脹較輕；D組大鼠腎臟色澤紅潤(rùn)，被膜無腫脹。
　?、阽R下觀察：A組大鼠腎臟腎小球、腎小管、腎間質(zhì)均未見異常；B組大鼠腎組織改變以腎小管為主，逐漸可見上皮細(xì)胞水腫、空泡變性、滲出壞死、管腔內(nèi)可見壞死顆粒；C組大鼠腎組織改變較B組程度有所減輕，且較晚出現(xiàn)；D組大鼠腎組織未見異常。
　　4實(shí)驗(yàn)大鼠腎

10、組織ICAM-1與INF-a免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：
　　4.1 ICAM-1在大鼠腎組織中的表達(dá)與分布
　?、買CAM-1的表達(dá)：A組大鼠腎組織中，僅在腎小管細(xì)胞膜處可見少量ICAM-1表達(dá)，在腎小球，腎小管周圍毛細(xì)血管及血管內(nèi)皮細(xì)胞處均未見ICAM-1明顯表達(dá)
　?、贐組大鼠腎組織中，可見ICAM-1在腎小管及腎小球細(xì)胞膜處廣泛表達(dá)，與A組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，于7d達(dá)高峰，此后表達(dá)有所下降，但14d表達(dá)

11、仍高于A組，與A組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　?、跜組大鼠腎組織中，可見ICAM-1在腎小管及腎小球細(xì)胞膜處表達(dá)，且表達(dá)自1d至14d時(shí)間點(diǎn)均較B組明顯降低，與B組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但表達(dá)在1d至14d時(shí)間點(diǎn)仍高于A組(P＜0.01)
　　④D組大鼠腎組織中的ICAM-1表達(dá)與A組無明顯差異
　　4.2 TNF-a在大鼠腎組織中的表達(dá)與分布：
　?、貯組大鼠腎組織中，僅在腎小管內(nèi)皮細(xì)

12、胞的胞漿內(nèi)偶可見TNF-a表達(dá)，而在腎小球周圍毛細(xì)血管等腎間質(zhì)區(qū)未見TNF-a明顯表達(dá)。
　?、贐組大鼠腎組織中，TNF-a主要表達(dá)在腎小管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，自1d時(shí)間點(diǎn)開始就顯著增高，至7d到達(dá)高峰，且至14d仍有明顯表達(dá)，與A組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　?、跜組大鼠腎組織中，TNF-a亦主要表達(dá)在腎小管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，自1d至14d其表達(dá)較B組明顯減弱，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與A組相比，自1d至

13、14dTNF-a的表達(dá)較高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　?、蹹組大鼠腎組織中，TNF-a同樣主要表達(dá)在腎小管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，與A組無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1 PO灌胃染毒可引起腎臟損傷，且在短期內(nèi)就可發(fā)現(xiàn)，表明PQ灌胃染毒是建立急性腎損傷動(dòng)物模型的可靠方法。
　　2 PQ染毒大鼠血漿SOD活力及GSH含量減少，MDA含量增加，表明氧自由基的產(chǎn)生及脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生可能是PQ導(dǎo)致腎臟損傷的機(jī)制之一