極性蛋白Scrib在原腸胚發(fā)生中作用研究.pdf

1、在胚胎發(fā)生過程中，從原腸期開始出現(xiàn)器官的發(fā)生和分化，神經(jīng)管、體節(jié)、心臟、腦、原腸、血管等都是在這個階段產(chǎn)生的，而這一切的開端始于囊胚期上胚層的細胞向中線運動形成原條產(chǎn)生中胚層(也叫EMT)。卵子及隨后的發(fā)育過程中，在受精卵內眾多因子參與到原條的細胞運動及后續(xù)器官發(fā)育中，而表達在上皮類細胞中的極性蛋白基因是重要的調控一族。果蠅中極性蛋白Scrib的缺失使得果蠅上皮細胞的極性缺失，細胞過度增殖；在人類中Scrib中作為腫瘤抑制基因發(fā)揮作用；

2、同時Scrib 也在神經(jīng)發(fā)育中對神經(jīng)突觸的功能的維持、內耳的發(fā)育也起到重要的作用。在我們前期的研究中在體外已經(jīng)證實了Scrib可以和Numb 結合負調控Notch信號。這條信號通路在體內是否有功能及有何功能，還沒有得到證實。本課題以雞胚作為動物模型研究體內情況下Scrib和Numb的異常表達對胚胎發(fā)育產(chǎn)生的影響及如何產(chǎn)生這種影響。
　　 我們通過原位雜交的方法分別檢測了Scrib、Numb的表達，探索兩種基因在原腸期的表達規(guī)律，

3、發(fā)現(xiàn)Scrib表達開始于HH 4 并在原條前端表達，表達集中，當?shù)竭_HH 7時則呈彌散性表達；Numb的表達在早期和Scrib 相同，但后期主要表達在神經(jīng)系統(tǒng)中。通過電轉染的方法分別過表達Scrib和Numb，發(fā)現(xiàn)過表達引起胚胎發(fā)育異常，過表達早期使得胚胎細胞遷移受阻，上胚層的細胞對中胚層的轉變受到抑制；后期過表達引起神經(jīng)管閉合緩慢，起到延緩發(fā)育的作用。
　　 我們用shRNA降調Scrib的表達發(fā)現(xiàn)了相反的現(xiàn)象，降調后促進神經(jīng)

4、管的發(fā)育。
　　 同時也檢測與神經(jīng)管發(fā)育有關的基因Pax-7、Islet-1等等，發(fā)現(xiàn)Pax-7表達不受影響，但Islet-1表達受到抑制。
　　 綜上所述，我們的結果發(fā)現(xiàn)Numb和Scrib的過表達和降調對EMT的轉變和神經(jīng)管的發(fā)育具有相關性，這對于我們進一步探索Scrib和Numb 結合信號的功能及下游分子機制打下牢固的基礎。
　　 結論：Scrib和numb在原腸期雞胚發(fā)育中起到重要作用，過表達Scrib和