TRPC6在Barrett食管發(fā)生中的作用研究.pdf

1、目的：
　　Barrett食管(Barrett’s esophagus,BE)被定義為食管復(fù)層鱗狀上皮被單層柱狀上皮所取代的病理現(xiàn)象。BE是胃食管反流病（Gastroesophageal reflex disease,GERD）的并發(fā)癥，與食管腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。它已經(jīng)被公認(rèn)為是食管腺癌最重要的癌前病變，其發(fā)展為食管腺癌的危險(xiǎn)性高達(dá)正常人的30～50倍。目前抑酸治療對(duì)反流性食管炎治療有效，從而減少BE的發(fā)生。這提示酸性刺激在BE的

2、發(fā)生過(guò)程中起到重要作用，但其具體發(fā)生機(jī)制目前尚不清楚，因此本課題擬通過(guò)研究酸性刺激如何促進(jìn)BE發(fā)生的作用機(jī)制，為BE的臨床治療靶點(diǎn)提供理論支持。
　　方法：
　　1.鈣離子成像技術(shù)檢測(cè)不同pH值及阻斷劑對(duì)SHEE細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化。
　　2.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)正常人食管下段粘膜和Barrett食管下段病變粘膜中CDX2、TRPC6的表達(dá)情況。
　　3.免疫印跡法檢測(cè)pH處理24小時(shí)以后HEEC細(xì)胞株中CDX2、

3、TRPC6的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1．鈣離子成像技術(shù)結(jié)果顯示：(1)與對(duì)照組（pH7.4）比較，在pH值為7.0、6.5、6.0時(shí)，SHEE細(xì)胞內(nèi)的鈣離子水平無(wú)明顯差異（P>0.05），在pH值為5.5、5.0時(shí)，SHEE細(xì)胞內(nèi)的鈣離子水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；(2)加入細(xì)胞內(nèi)鈣螯合劑BAPTA-AM和TRPC6阻斷劑SKF96365后，SHEE細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高被顯著抑制（P<0.05）。

4、
　　2．免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示：CDX2、TRPC6在正常食管粘膜組織和BE食管粘膜組織中均有表達(dá)，與正常食管粘膜組（NE）比較，Barrett食管粘膜組(BE)中的表達(dá)水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且CDX2與TRPC6在BE中的表達(dá)具有相關(guān)性。
　　3.免疫印跡結(jié)果顯示：pH值為5.5處理HEEC細(xì)胞24小時(shí)后與對(duì)照組（pH7.2）相比TRPC6和CDX2蛋白表達(dá)上調(diào)（P<0.05），加入阻斷劑BA