MRPL35蛋白在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中作用的初步研究.pdf

1、背景及目標:
　　線粒體核糖體蛋白（MRPs）于胞漿合成并經靶向輸送至線粒體后，組裝為線粒體核糖體，參與線粒體蛋白的翻譯過程。相關的研究表明，MRPs在多種惡性腫瘤中的表達出現異常。我們前期研究結果發(fā)現結直腸癌細胞中MRPL35的表達水平上調，本文將初步分析MRPL35在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　1.收集2005-2006年的151例結直腸癌患者的組織蠟塊，制作組織芯片，通過免疫組化檢測MRPL35的

2、表達；分析26對結直腸癌患者組織中MRPL35 mRNA和蛋白的表達水平；運用Kaplan–Meier方法繪制生存曲線；對變量進行單因素/多因素COX回歸分析，篩選獨立預后因素。
　　2.熒光定量PCR和Western blot檢測結直腸癌及癌旁組織以及4種結直腸癌細胞中MRPL35 mRNA和蛋白水平的表達。慢病毒介導的RNAi敲低細胞中MRPL35的表達水平，分別采用MTT實驗、克隆形成實驗以及流式細胞術的方法，觀察MRPL3

3、5對細胞增殖、凋亡和細胞周期的作用。
　　結果：
　　1.組織芯片結果顯示MRPL35主要在胞漿表達，且結直腸癌組織中的表達高于癌旁組織（P<0.05）。MRPL35的表達水平與淋巴結轉移、遠處轉移、TNM分期以及病理類型呈正相關（P<0.05），與病人術后生存期呈負相關（P<0.05）。
　　2.qPCR及Western blot結果顯示癌組織中MRPL35的表達水平高于癌旁組織（P<0.05）；4種結直腸癌細胞中M

4、RPL35表達水平均高于正常結直腸粘膜細胞FHC。
　　3.RNAi敲低HCT116和SW480細胞的MRPL35，感染5天后，HCT116細胞的增殖能力減弱85％左右，SW480細胞的增殖能力減弱71％左右。HCT116細胞的凋亡率增加72％，SW480細胞的凋亡率增加100％。HCT116和SW480的細胞周期停滯在G2/M期。
　　結論：
　　MRPL35促進結直腸癌細胞增殖，其表達水平升高與患者術后生存期有密切