外膜縱行小切口神經(jīng)完全橫斷法構(gòu)建坐骨神經(jīng)損傷動(dòng)物模型.pdf

1、急性周?chē)窠?jīng)損傷是個(gè)亟需解決的醫(yī)學(xué)難題，損傷后病殘率極高，學(xué)者們一直努力制作符合各種損傷機(jī)制的周?chē)窠?jīng)損傷模型，促進(jìn)及損傷修復(fù)研究不斷的發(fā)展和前進(jìn)。但回顧既往模型建立的方法中，周?chē)窠?jīng)復(fù)制確切損傷程度、操作技術(shù)難度及神經(jīng)再生修復(fù)的優(yōu)劣之間的困擾，限制著模型及周?chē)窠?jīng)再生修復(fù)研究的發(fā)展。
　　為此，本研究從解剖學(xué)角度討論并敘述一種新的模型建立方法及思路，即外膜縱行小切口神經(jīng)完全橫斷法，簡(jiǎn)便并穩(wěn)定的制作周?chē)窠?jīng)sunderlandⅣ度

2、損傷，直視下完成周?chē)旌闲陨窠?jīng)束間完全且均等的損傷，降低顯微操作難度及時(shí)間，避免斷端外膜吻合修復(fù)時(shí)引入的對(duì)位不良及局部張力過(guò)大，減少外膜內(nèi)的相對(duì)獨(dú)立環(huán)境的破壞。
　　目的：降低模型制作難度，降低模型操作技術(shù)準(zhǔn)入門(mén)檻，提高模型的穩(wěn)定性、可操作性及重復(fù)性，神經(jīng)損傷再生修復(fù)預(yù)后良好，填補(bǔ)了SunderlandⅣ度損傷模型的空白，為神經(jīng)損傷模型使用及選擇提供了一種新思路及方法。
　　方法：
　　1.動(dòng)物分組及模型制備
　

3、　實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠（雄性12周，64只），對(duì)比建立經(jīng)典的完全橫斷法模型隨機(jī)均等分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，即實(shí)驗(yàn)組為外膜縱形小切口完全橫斷法，各32只，對(duì)照組為完全橫斷法。兩組操作分別如下。
　　實(shí)驗(yàn)組：麻醉滿(mǎn)意后俯臥位固定，碘伏消毒后取大鼠右側(cè)下肢股后外側(cè)縱向切口，長(zhǎng)約3cm，鈍性分離股后肌間隙，15倍顯微鏡下游離并顯露右側(cè)坐骨神經(jīng)，取梨狀肌下緣1cm處，顯微剪縱行剪開(kāi)神經(jīng)外膜約3mm，無(wú)創(chuàng)顯微鑷適當(dāng)牽拉分離外膜暴露神經(jīng)纖維，適當(dāng)牽拉神

4、經(jīng)纖維后直視下銳性完全剪斷，予9-0無(wú)創(chuàng)線(xiàn)3針縫合神經(jīng)外膜縱口，逐層閉合創(chuàng)口。
　　對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)組相同方法暴露右側(cè)坐骨神經(jīng)，相同神經(jīng)水平刀片銳性離斷后9-0無(wú)損傷線(xiàn)外膜縫合法縫合。
　　2.行為學(xué)檢查
　　采用De Medinaceli法檢查坐骨神經(jīng)指數(shù)（SFI），予術(shù)前第1天、術(shù)后第1天、術(shù)后第2、4、8、12周分別檢查實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組組隨機(jī)各取8只。
　　3.電生理檢查
　　術(shù)中及術(shù)后4、8、12周，實(shí)驗(yàn)

5、組和對(duì)照組中隨機(jī)各取8只大鼠，采用Medtronic Keypoint肌電/誘發(fā)肌電儀，檢測(cè)坐骨神經(jīng)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MNCV)。
　　4.組織學(xué)檢查:
　　術(shù)后2、4、8、12周，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組兩組中隨機(jī)各取8只大鼠，取右側(cè)坐骨神經(jīng)吻合口兩側(cè)約5mm組織，固定、脫水、切片及HE染色后送光鏡檢查。
　　5.Masson染色檢查
　　術(shù)后第4、12周，實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組兩組中隨機(jī)各取4只大鼠，取右側(cè)坐骨神經(jīng)吻合口兩側(cè)約

6、5mm組織，脫水切片后行Masson染色檢查。
　　6.形態(tài)學(xué)檢查
　　術(shù)后第12周，實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組兩組中隨機(jī)各取4只大鼠，取材后以神經(jīng)吻合口為中心修剪成2mm×lmm×1mm組織塊，固定、包埋、染色，透射電鏡下觀(guān)察。
　　7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　計(jì)量資料以mean±SD表示，采用SPSS17.0軟件(SPSS,Chicago,IL,USA)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，多組間比較采用單因素方差分析，組間均數(shù)兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)

7、，以P<0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)表明，實(shí)驗(yàn)組顯微操作難度及時(shí)間明顯降低，在結(jié)構(gòu)檢查中，術(shù)后第2、4周HE染色提示實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均出現(xiàn)典型的華勒氏變性，兩組間未見(jiàn)差異，術(shù)后第8、12周HE檢查提示實(shí)驗(yàn)組髓神經(jīng)纖維生長(zhǎng)及軸突形成明顯，術(shù)后第4、8周Masson染色提示實(shí)驗(yàn)組再生神經(jīng)髓鞘同心圓排列整齊、致密，瘢痕形成少，術(shù)后12周行電鏡檢查提示再生髓鞘形態(tài)正常且完整，板層排列緊密，均優(yōu)于對(duì)照組。
　　功能學(xué)檢查

8、包括坐骨神經(jīng)指數(shù)（SFI）及神經(jīng)電傳導(dǎo)檢查，結(jié)果提示術(shù)后4周內(nèi)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組坐骨神經(jīng)指數(shù)及神經(jīng)電傳導(dǎo)檢查無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，術(shù)后4-12周提示坐骨神經(jīng)指數(shù)及神經(jīng)電傳遞檢查存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，實(shí)驗(yàn)組坐骨神經(jīng)損傷側(cè)肢體運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)電傳導(dǎo)恢復(fù)檢查結(jié)果優(yōu)于對(duì)照組。
　　結(jié)論：外膜縱形小切口完全橫斷法模型已成功建立，具備經(jīng)典完全橫斷法模型的直視下完全均等等損傷優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)大大降低了顯微操作難度及時(shí)間，神經(jīng)損傷再生修復(fù)結(jié)果良好，擴(kuò)充了神經(jīng)損傷模型中Sund