羧甲司坦對(duì)慢性氣道炎癥大鼠肺組織中PI3K-AKT和γ-GCS表達(dá)的影響.pdf

1、研究目的
　　 1.探討慢性氣道炎癥大鼠肺組織中磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)和γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)的表達(dá)及其相互關(guān)系,證明PI3K/AKT通路可能參與慢性阻塞性肺疾病的氧化抗氧化失衡,進(jìn)一步了解COPD的氧化抗氧化機(jī)制,為COPD的診斷和治療提供新的思路。
　　 2.應(yīng)用羧甲司坦對(duì)慢性氣道炎癥大鼠進(jìn)行干預(yù),探討羧甲司坦對(duì)PI3K/AKT和γ-GCS的影響,進(jìn)一步說明羧甲司坦的

2、抗氧化、抗炎作用,為羧甲司坦的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料方法
　　 購(gòu)置鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心30只清潔級(jí)雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為三組:正常對(duì)照組(A)、模型組(B)、羧甲司坦治療組(C),每組10只。模型組和羧甲司坦治療組應(yīng)用兩次氣管內(nèi)注入脂多糖加每天兩次煙熏法制作大鼠慢性氣道炎癥模型;羧甲司坦治療組第17～30天上午煙熏前半小時(shí)給予羧甲司坦(500mg/kg)灌胃;正常對(duì)照組用生理鹽水代替脂多糖行氣管內(nèi)注

3、入、生理鹽水1.5 ml灌胃。全部大鼠第31天麻醉并處死,行肺泡灌洗進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù);取肺組織行HE染色病理檢查;γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)及磷酸化的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(P-AKT)的表達(dá)用免疫組化的方法測(cè)定;磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)mRNA、γ-GCSmRNA的表達(dá)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)半定量(RT-PCR)的方法測(cè)定。所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.大鼠的

4、癥狀比較:模型組大鼠出現(xiàn)咳嗽、氣喘的癥狀;羧甲司坦治療組大鼠較模型組大鼠有所改善;正常對(duì)照組大鼠未見明顯異常。
　　 2.大鼠的肺組織病理比較:正常對(duì)照組大鼠氣道上皮細(xì)胞完整,肺組織結(jié)構(gòu)正常;模型組上皮細(xì)胞脫落、壞死嚴(yán)重,可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);治療組上皮細(xì)胞脫落壞死及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組減輕。
　　 3.大鼠肺泡灌洗液的分類計(jì)數(shù):正常對(duì)照組、模型組、羧甲司坦治療組BALF中細(xì)胞總數(shù)分別為(1.65±0.38)×105、(

5、7.32±0.77)×105、(4.20±0.61)×105;BALF中單核.巨噬細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)比例分別為(81.13±2.58)％、(65.15±4.85)%、(78.15±5.41)%;BALF中中性粒細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)比例分別為(13.21±1.76)%、(30.43±4.54)%、(16.14±3.94)%;BALF中淋巴細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)比例分別為(5.66±0.91)%、(4.42±1.19)%、(5.71±2.37)%。
　

6、　 4.大鼠肺組織中γ-GCS蛋白、P-AKT蛋白的表達(dá):正常對(duì)照組、模型組、羧甲司坦治療組肺組織中γ-GCS蛋白的表達(dá)分別為113.87±3.49、145.09±9.58、126.51±4.76;肺組織中P-AKT蛋白的表達(dá)分別為106.64±5.91、151.33±11.09、130.48±4.86。
　　 5.大鼠肺組織中PI3KmRNA、γ-GCSmRNA的表達(dá):正常對(duì)照組、模型組、羧甲司坦治療組肺組織中γ-GCSmR

7、NA的表達(dá)分別為0.15±0.02、0.45±0.05、0.21±0.04;肺組織中PI3KmRNA的表達(dá)分別為0.45±0.07、1.17±0.11、0.87±0.09。
　　 6.大鼠肺組織中GSH、ROS、T-AOC的表達(dá):GSH在模型組較對(duì)照組兩倍增加、較治療組也顯著增加,而ROS增加更為顯著,T-AOC較治療組和對(duì)照組顯著降低。
　　 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:BALF中細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞分類是模型組＞治療組＞正常對(duì)照

8、組,而淋巴細(xì)胞分類、單核.巨噬細(xì)胞分類是正常對(duì)照組＞治療組＞模型組(差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05);肺組織中γ-GCS蛋白、P-AKT蛋白、PI3KmRNA、γ-GCSmRNA的表達(dá)均是模型組＞治療組＞正常對(duì)照組(差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05);慢性氣道炎癥大鼠肺組織中P-AKT與γ-GCS蛋白及γ-GCSmRNA的表達(dá)皆呈顯著的正相關(guān)(r為0.812、0.741,P＜0.001)。
　　 結(jié)論
　　 1.P-A