基層醫(yī)療機構大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌氟喹諾酮耐藥分子流行及遺傳特征研究.pdf

1、氟喹諾酮是一類人工合成藥物，抗菌譜廣，是臨床使用最廣泛的一類抗菌藥物，其耐藥也尤為突出。自20世紀90年代以來，我國呈現(xiàn)出大腸埃希菌高頻耐藥(64.5％-71.8％)現(xiàn)象，有關耐藥調(diào)查以及機制研究大多集中在中心城市三級醫(yī)院，縣級醫(yī)院及社區(qū)感染細菌耐藥研究極少，開展縣級醫(yī)療機構社區(qū)感染患者細菌對喹諾酮類的耐藥研究，有助于指導這類醫(yī)療機構感染治療和抗菌藥物合理使用。
　　本研究第一部分收集來自全國七個地區(qū)30家縣級醫(yī)院社區(qū)感染非重復大

2、腸埃希菌590株，肺炎克雷伯菌569株。細菌體外藥敏試驗檢測其對17種抗菌藥物的敏感性;PCR方法檢測質(zhì)粒介導的喹諾酮耐藥(PMQR)基因:qnrA，qnrB，qnrC，qnrD，qnrS，aac(6')-Ib-cr，qepA和oqxAB及喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)DNA旋轉(zhuǎn)酶gyrA，gyrB亞基和拓撲異構酶Ⅳ parC，parE亞基突變，采用DNASTAR軟件分析測序結果，突變比較參照E.coli k-12和Klebsiellap

3、neumoniae MGH78578;對非QRDR介導耐藥菌株進行外排泵抑制試驗。
　　試驗結果顯示590株大腸埃希菌對環(huán)丙沙星的耐藥率為51.2％，PMQR基因檢出率為37.3％，qnr類的流行率為3.7％，aac(6')Ib-cr19.7％，qepA14.1％，oqxAB3.9％。24株同時攜帶2種以上PMQR基因。環(huán)丙沙星耐藥組100％存在QRDR突變，93.7％是3個以上位點突變;敏感組66.7％存在QRDR突變。569株

4、肺炎克雷伯菌對環(huán)丙沙星耐藥率為8.3％，PMQR檢出率為70.0％，qnr類流行率為36.6％，aac(6') Ib-cr9.1％，qepA43.8％。環(huán)丙沙星耐藥組73.9％存在QRDR突變，19.6％是3個以上位點突變。敏感組4％存在QRDR突變。12株(26.1％)肺炎克雷伯菌為非QRDR介導耐藥，環(huán)丙沙星最低抑菌濃度(MIC)可被外排泵抑制劑N-甲基吡咯烷酮(NMP)降為敏感水平。
　　分子流行病學研究發(fā)現(xiàn)，縣級醫(yī)院社區(qū)感

5、染大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌氟喹諾酮耐藥率相差懸殊(51.2％ versus8.3％)，原因除肺炎克雷伯菌氟喹諾酮耐藥率相比大腸埃希菌長期處于較低水平外，還與肺炎克雷伯菌24.5％（大腸埃希菌9.9％）來自0-14歲兒童有關，該組環(huán)丙沙星的耐藥率僅為4.2％。大腸埃希菌在耐藥組(100％)甚至敏感組(66.7％)都有很高的QRDR突變率，對QRDR突變的積累明顯高于肺炎克雷伯菌（耐藥組73.9％，敏感組4％）。
　　本研究第二部分對

6、302株環(huán)丙沙星耐藥大腸埃希菌和46株環(huán)丙沙星耐藥肺炎克雷伯菌遺傳特征及多PMQR菌株耐藥質(zhì)粒傳播特征進行研究。大腸埃希菌MLST分型選用UCC數(shù)據(jù)庫(http://mlst.ucc.ie/mlst/dbs/Ecoli)，肺炎克雷伯菌MLST分型選用pasteur數(shù)據(jù)庫(http://bigsdb.web.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.html)。測序結果在數(shù)據(jù)庫中在線比對，獲得等位基因型和序列型(S

7、T)。氟喹諾酮耐藥菌株遺傳進化分析采用eBURST V3和商業(yè)化Bionumerics軟件。多PMQR耐藥質(zhì)粒復制子分型采用基于PCR的分型方法PBRT+ColE+IncR，可對腸桿菌科20種常見復制子進行分型。并對這些多PMQR耐藥質(zhì)粒進行接合傳播試驗。
　　試驗結果顯示302株環(huán)丙沙星耐藥大腸埃希菌共有60種ST型。常見流行型為ST131(14.6％), ST1193(7.9％), ST405(6.6％), ST69(6.3％

8、), ST648(6.3％)。華東、中南、華北、東北、西北、華南和西南地區(qū)分別有15、26、28、11、17、22和13種。46株環(huán)丙沙星耐藥肺炎克雷伯菌共有23種ST型?？寺秃象wCC11(ST11，ST340，AT258)占15.2％，其次為ST1(13.0％)，ST15(10.9％)，ST147(10.9％)和ST875(8.7％)。華東、中南、華北、東北、西北、華南和西南地區(qū)分別有3、2、5、4、8、5和7種。大腸埃希菌多PMQ

9、R耐藥質(zhì)粒復制子83.3％為IncF，大多與其他復制子共存，45.8％可接合轉(zhuǎn)移耐藥基因。肺炎克雷伯菌多PMQR耐藥質(zhì)粒復制子70％為ColE-like，75％可接合轉(zhuǎn)移耐藥基因。
　　本研究通過第二部分耐藥氟喹諾酮遺傳特征分析和多PMQR耐藥質(zhì)粒復制子分型和傳播特征研究發(fā)現(xiàn)氟喹諾酮耐藥大腸埃希菌序列型多樣，在各地區(qū)呈散在分布，沒有暴發(fā)流行克隆型。肺炎克雷伯菌雖然僅46株對環(huán)丙沙星耐藥，但序列型也很豐富，達23種。也呈散在分布，無