40株P(guān)MQR基因陽(yáng)性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs流行特征的研究.pdf

1、第一部分:PMQR基因陽(yáng)性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性分析
　　目的:了解臨床分離含質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因(PMQR)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對(duì)體外抗生素的敏感實(shí)驗(yàn)和檢測(cè)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamasesESBLs)株陽(yáng)性率,了解PMQR基因陽(yáng)性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs菌株分布及其表型。
　　菌株來(lái)源:40株含PMQR基因臨床分離株(21大腸埃希菌和19株肺炎

2、克雷伯菌)采用全自動(dòng)微生物分析儀對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重新鑒定。包括2株qnrA、3株qnrB4、9株qnrS1,2株同時(shí)包含有qnrA和qnrS1,19株aac(6′)-Ib-cr,3株qepA及2株同時(shí)包含有qepA和aac(6′)-Ib-cr,均收集于2008-2009年自安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科。大腸埃希菌ATCC25922為質(zhì)控菌株,肺炎克雷伯菌ATCC700603為產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶株。方法:根據(jù)2009年美國(guó)臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員

3、會(huì)推薦的的標(biāo)準(zhǔn),采用瓊脂對(duì)倍稀
　　釋法對(duì)安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科收集的40株含PMQR基因的大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌對(duì)臨床14種抗菌藥物的藥物敏感實(shí)驗(yàn)。雙紙片確證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ESBLs并分析其耐藥表型。對(duì)PMQR陽(yáng)性的菌株進(jìn)行轉(zhuǎn)移接合實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證PMQR與blaESBLs基因的轉(zhuǎn)移性;同時(shí)對(duì)接合子進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果:MIC試驗(yàn)顯示,除了對(duì)多種喹諾酮類抗菌藥物顯著耐藥外,40株臨床分離含PMQR基因的菌株還具有ESBL

4、s的表型,對(duì)青霉素類(哌拉西林)、第一代頭孢菌素(頭孢唑啉)、第二代頭孢菌素(頭孢呋辛)、第三代頭孢菌素中的頭孢噻肟及頭孢他啶顯示耐藥。經(jīng)表型確證試驗(yàn),40株細(xì)菌均為產(chǎn)ESBLs菌株。
　　與受體菌相比,100％的接合子對(duì)頭孢噻肟的MIC增長(zhǎng)了32-1024倍,43.4%(13/30)的接合子對(duì)頭孢他啶的MIC增長(zhǎng)了2-256倍,16.7%(5/30)的接合子對(duì)頭孢吡肟的MIC增長(zhǎng)了4-128倍。53.3%(16/30)的接合子對(duì)

5、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星的MIC分別增長(zhǎng)了8-128倍和2-128倍。一株原菌對(duì)美洛培南耐藥,接合子MIC雖然顯示敏感,但與受體菌相比,仍增長(zhǎng)了8倍。90%或以上的接合子對(duì)慶大霉素和阿米卡星的MIC分別增長(zhǎng)了64-256和2-128倍。接合子藥敏結(jié)果顯示,β內(nèi)酰胺類耐藥常與其他抗菌藥物耐藥被共同轉(zhuǎn)移,如喹諾酮類,氨基糖苷類及單環(huán)內(nèi)酰胺類。
　　結(jié)論:含PMQR基因的菌株除了對(duì)多種喹諾酮類抗菌藥物顯著耐藥外,常具有產(chǎn)ESBLs的表型,對(duì)

6、青霉素類(哌拉西林)、第一代頭孢菌素(頭孢唑啉)、第二代頭孢菌素(頭孢呋辛)、第三代頭孢菌素中的頭孢噻肟及頭孢他啶耐藥及氨基糖甙類等常用抗菌藥物耐藥,應(yīng)加強(qiáng)耐藥性監(jiān)測(cè)和防治。
　　第二部分:PMQR基因陽(yáng)性大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs基因的檢測(cè)與分子流行病學(xué)研究
　　目的:了解40株臨床分離含質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因(PMQR)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中編碼超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的基因型別,及與PMQR

7、基因在本地區(qū)共同傳播的流行現(xiàn)狀和耐藥特征。
　　方法:用煮沸法提取細(xì)菌總DNA,用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增ESBLs基因,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行雙向序列分析,測(cè)序結(jié)果在Genbank上比對(duì)測(cè)序結(jié)果,明確blaESBLs基因型;應(yīng)用ERIC-PCR技術(shù)分析PMQR陽(yáng)性菌株克隆流行傳播情況,進(jìn)行同源性分析。
　　結(jié)果:PMQR陽(yáng)性菌株中blaESBLs基因型分布詳見表2,40株臨床分離含PMQR基因大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌

8、中共有24株(24/40,60%)檢測(cè)出blaESBLs基因,主要是CTX-M-9組和CTX-M-1組(見圖1),檢出率分別為35%(14/40)和27.5%(11/40)。45%(18/40)的菌株同時(shí)攜帶兩種或兩種以上的β內(nèi)酰胺酶基因。大腸埃希菌中最常見的blaESBLs基因?yàn)镃TX-M-14(5/21,23.8%),其次為CTX-M-15(2/21,9.5%);肺炎克雷伯菌中最常見的blaESBLs基因?yàn)镃TX-M-3(4/19,

9、21%)與CTX-M-65(3/19,15.8%)。大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌中廣譜β內(nèi)酰胺酶TEM-1型的檢出率分別達(dá)到42.9%(9/21)、57.9%(11/19);肺炎克雷伯菌中SHV型ESBLs僅檢出SHV-12與SHV-26型各1株,余均為廣譜β-內(nèi)酰胺酶SHV-1及SHV-11型。ERIC-PCR結(jié)果顯示菌株間沒(méi)有一致條帶,不屬于同一血清型。
　　結(jié)論:本地區(qū)大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌存在PMQR與blaESBLs基因的