兒童糞便分離大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs和PMOR的檢測.pdf

1、目的:本研究通過對兒童糞便標本分離的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌進行β-內酰胺酶和質粒介導喹諾酮耐藥(PMQR)基因的檢測，明確兒童腸道中大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs和PMQR基因的攜帶情況;通過脈沖場凝膠電泳(PFGE)和多位點序列分型(MLST)等，了解耐藥菌株之間的分子流行病學情況。
　　方法:紙片擴散法篩選耐藥菌株;瓊脂稀釋法測定抗生素最低抑菌濃度(MIC);PCR擴增β-內酰胺酶（blaTEM、blaSHV和blaC

2、TX-M）和PMQR(qepA、qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6')-Ib、oqxA和oqxB）基因，研究細菌對頭孢菌素類抗生素和喹諾酮類抗生素耐藥的分子機制;脈沖場凝膠電泳(PFGE)、多位點序列分型(MLST)和系統(tǒng)發(fā)育分型（phylogenetic group）等分子分型研究菌株之間的同源性關系。
　　結果:兒童糞便分離的腸桿菌科細菌以大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌最為常見。從114份兒童糞便標本共分離

3、到98株(64.9％)大腸埃希菌和18株(11.9％)肺炎克雷伯菌。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的檢出率分別為45.9％(45/98)和38.9％(7/18)。產ESBLs大腸埃希菌以CTX-M-14和CTX-M-55基因型為主。產ESBLs肺炎克雷伯菌以CTX-M-14和CTX-M-15基因型為主。首次在臨床菌株中發(fā)現(xiàn)了blaCTX-M-104基因，以及檢測到了嵌合重組型blaCTX-M-123。系統(tǒng)發(fā)育分型顯示，產ESBLs大

4、腸埃希菌以D型為主(42.2％，19/45)，其次為A型(26.7％，12/45)，B2型(20％，9/45)，B1型(11.1％，5/45)。MLST分型顯示，產ESBLs大腸埃希菌以CC10、ST38、ST131、ST648和ST69為主，發(fā)現(xiàn)了1種新型ST型。7株產ESBLs肺炎克雷伯菌的ST型均不同，同時發(fā)現(xiàn)了3種新型ST型。PFGE表明產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌均為不同克隆菌株。兒童腸道中大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對環(huán)

5、丙沙星的耐藥率分別為27.6％(27/98)和5.6％(1/18)。PMQR的檢出率為6.9％(8/116)，其中oqxAB、qnrS1和aac(6')-Ib-cr的檢出率分別為4.3％(5/116)、2.5％(3/116)和2.5％(3/116)。所有PMQR均在產ESBLs菌株中檢出，aac(6')-b-cr，oqxAB和qnrS1為本研究中主要的PMQR型。
　　結論:兒童糞便分離的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對頭孢菌素類和喹諾

6、酮類抗生素的耐藥率均非常高。腸桿菌科細菌ESBLs攜帶率高達37.7％，基因型以blaCTX-M-14和blaCTX-M-55為主。CTX-M型ESBLs的產生是腸桿菌科細菌對頭孢菌素類抗生素耐藥的主要原因。產ESBLs大腸埃希菌以B2-ST131，D-ST648，D-ST38，A-CC10，D-ST69為主要的ST型。兒童腸道PMQR攜帶率為13.4％(7/52)，PMQR的檢出率為6.9％(8/116)。基因主要包括aac(6')-