頭孢他啶耐藥的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM型超廣譜β內酰胺酶的研究.pdf

1、【目的】檢測全國19家醫(yī)院大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中的TEM型超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)。 【方法】收集2004～2005年全國19家醫(yī)院對頭孢他啶耐藥的大腸埃希菌98株和肺炎克雷伯菌109株。以瓊脂稀釋法測定菌株MICs，并檢測其ESBL陽性率，PCR擴增bla<,TEM>基因。bla<,TEM>基因陽性菌株進行接合實驗，并測定接合子MICs，PCR檢測其bla<,TEM>基因。等電聚焦電泳(IEF)檢測bla<,TEM

2、>基因陽性的菌株及接合子所攜帶β-內酰胺酶的等電點。變性高效液相色譜(DHPLC)檢測bla<,TEM>基因陽性菌株的點突變。根據菌株藥敏譜、接合實驗、IEF和DHPLC檢測結果，選取有代表性菌株進行測序。收集檢出突變菌株的宿主患者所分離的所有菌株及其所在病房分離的對頭孢他啶不敏感的菌株，進行藥敏試驗、bla<,TEM>基因PCR擴增、Enterobacterial Repetitve Intergenic Consensus sequ

3、ence PCR(ERIC-PCR)和Randomly.Amplified Polymorphic DNA(RAPD)分型、DHPLC分析以及DNA測序。 【結果】對頭孢他啶耐藥的98株大腸埃希菌和109株肺炎克雷伯菌，對亞胺培南最為敏感，敏感率分別為100％和99.1％，而對頭孢噻肟最不敏感，敏感率分別僅為8.2％和12.8％。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBL陽性率分別為84.7％和68.8％，bla<,TEM>基因陽性率分

4、別為67.3％和69.7％，接合成功率分別為63.6％和77.6％。IEF顯示在TEM型β-內酰胺酶等電點(pI)分布的pH 5.2～6.5范圍內，僅有4株大腸埃希菌及其接合子具有pI=5.4以外的條帶。經DHPLC和測序檢測，僅1株大腸埃希菌P34表達TEM-12型ESBL，其它均為TEM-1。P34宿主患者D分離的21株大腸埃希菌中有18株表達TEM-12，所有菌株均屬同一克隆。該患者住院期間所在呼吸科病房分離的11株對頭孢他啶不敏