頭孢他啶耐藥的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM型超廣譜β內(nèi)酰胺酶的研究.pdf

1、【目的】檢測(cè)全國(guó)19家醫(yī)院大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中的TEM型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)。 【方法】收集2004～2005年全國(guó)19家醫(yī)院對(duì)頭孢他啶耐藥的大腸埃希菌98株和肺炎克雷伯菌109株。以瓊脂稀釋法測(cè)定菌株MICs，并檢測(cè)其ESBL陽性率，PCR擴(kuò)增bla<,TEM>基因。bla<,TEM>基因陽性菌株進(jìn)行接合實(shí)驗(yàn)，并測(cè)定接合子MICs，PCR檢測(cè)其bla<,TEM>基因。等電聚焦電泳(IEF)檢測(cè)bla<,TEM

2、>基因陽性的菌株及接合子所攜帶β-內(nèi)酰胺酶的等電點(diǎn)。變性高效液相色譜(DHPLC)檢測(cè)bla<,TEM>基因陽性菌株的點(diǎn)突變。根據(jù)菌株藥敏譜、接合實(shí)驗(yàn)、IEF和DHPLC檢測(cè)結(jié)果，選取有代表性菌株進(jìn)行測(cè)序。收集檢出突變菌株的宿主患者所分離的所有菌株及其所在病房分離的對(duì)頭孢他啶不敏感的菌株，進(jìn)行藥敏試驗(yàn)、bla<,TEM>基因PCR擴(kuò)增、Enterobacterial Repetitve Intergenic Consensus sequ

3、ence PCR(ERIC-PCR)和Randomly.Amplified Polymorphic DNA(RAPD)分型、DHPLC分析以及DNA測(cè)序。 【結(jié)果】對(duì)頭孢他啶耐藥的98株大腸埃希菌和109株肺炎克雷伯菌，對(duì)亞胺培南最為敏感，敏感率分別為100％和99.1％，而對(duì)頭孢噻肟最不敏感，敏感率分別僅為8.2％和12.8％。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBL陽性率分別為84.7％和68.8％，bla<,TEM>基因陽性率分

4、別為67.3％和69.7％，接合成功率分別為63.6％和77.6％。IEF顯示在TEM型β-內(nèi)酰胺酶等電點(diǎn)(pI)分布的pH 5.2～6.5范圍內(nèi)，僅有4株大腸埃希菌及其接合子具有pI=5.4以外的條帶。經(jīng)DHPLC和測(cè)序檢測(cè)，僅1株大腸埃希菌P34表達(dá)TEM-12型ESBL，其它均為TEM-1。P34宿主患者D分離的21株大腸埃希菌中有18株表達(dá)TEM-12，所有菌株均屬同一克隆。該患者住院期間所在呼吸科病房分離的11株對(duì)頭孢他啶不敏