生物被膜肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的耐藥性和基因型分析.pdf

1、目的： 研究臨床分離的肺炎克雷伯菌（KP）在體外形成生物被膜（BF）的情況，檢測(cè)生物被膜KP中超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）的產(chǎn)生，分析并探討其耐藥性和耐藥基因的分型。 方法： 1、采用改良平板法在體外建立KP生物被膜模型，在普通光鏡和掃描電鏡下進(jìn)行觀察與鑒定；采用結(jié)晶紫染色法對(duì)形成的BF進(jìn)行定量分析，并對(duì)形成BF的菌株就其標(biāo)本種類(lèi)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2、用三維試驗(yàn)對(duì)建立BF模型的KP菌株中ESBLs的產(chǎn)

2、生情況進(jìn)行檢測(cè)。 3、將產(chǎn)ESBLs的生物被膜KP歸為B組，浮游狀態(tài)下的相應(yīng)菌株歸為A組。用K-B法對(duì)兩組細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。 4、用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）對(duì)B組中的細(xì)菌進(jìn)行blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因擴(kuò)增，將產(chǎn)物分別克隆入pMD18-T載體后測(cè)定其核苷酸序列，分析其基因亞型。 結(jié)果： 1、臨床分離的60株ESBLs陰性KP有46株在體外成功建立了BF模型。定量分析之后對(duì)其粘附性及生物被

3、膜形成能力進(jìn)行劃分，結(jié)果表明弱陽(yáng)性（+）為7株（15.2％），中等陽(yáng)性（++）為15株（32.6％），強(qiáng)陽(yáng)性（+++）為24株（52.2％）。對(duì)BF形成菌株就其標(biāo)本種類(lèi)進(jìn)行X2檢驗(yàn)：不同種類(lèi)的標(biāo)本構(gòu)建成功率相似，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2、46株生物被膜KP經(jīng)過(guò)三維試驗(yàn)檢出9株（19.6％）ESBLs為陽(yáng)性。 3、藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明A組中的KP對(duì)頭孢呋辛、頭孢他啶耐藥性較高，對(duì)頭孢噻肟敏感性較低，對(duì)頭孢曲松和氨曲南則

4、較敏感。而B(niǎo)組中的細(xì)菌對(duì)以上藥物均表現(xiàn)出高度耐藥。 4、經(jīng)PCR擴(kuò)增，B組中9株（100％）細(xì)菌均擴(kuò)增出SHV型基因，沒(méi)有單獨(dú)擴(kuò)增出TEM和CTX-M基因。但有4株（44.5％）細(xì)菌中同時(shí)存在SHV型和TEM型基因。 5、對(duì)B組細(xì)菌基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆后測(cè)序，經(jīng)BLAST進(jìn)行同源性比較有1株屬于SHV-5型，5株屬于SHV-12型，3株屬于SHV-28型。TEM型均為T(mén)EM-1型。 結(jié)論： 1、絕大多