HBV感染與膽紅素、鐵調(diào)素的關(guān)聯(lián)分析及鐵調(diào)素的調(diào)控機制.pdf

1、目的：
　　探討HBV感染及肝損傷程度與具有潛在抗氧化活性同時也是肝損傷標志物的膽紅素和鐵代謝核心調(diào)控分子鐵調(diào)素（hepcidin）的關(guān)聯(lián)性，并從氧化應(yīng)激角度揭示HBV感染影響hepcidin表達的相關(guān)機制與信號通路。
　　方法：
　　1.基于東風(fēng)-同濟隊列研究2013年隨訪的橫斷面資料，納入28,500名研究對象，在比較HBsAg攜帶者與非攜帶人群膽紅素水平差異的基礎(chǔ)上，采用Logistics回歸分析方法，分析HBs

2、Ag攜帶者不同類型膽紅素與反映肝損傷程度的非侵入性指標之間的關(guān)聯(lián)性。
　　2.選取在華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院感染科就診的192名研究對象（不同程度的慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B,CHB）患者172例，對照組20例），在應(yīng)用多因素Logistics回歸分析CHB患者與鐵代謝紊亂程度相關(guān)性的基礎(chǔ)上，探討其與hepcidin的關(guān)系，探尋更為敏感和特異的預(yù)測預(yù)警CHB肝損傷程度指標。
　　3.基于前

3、一部分研究結(jié)果，采用兩段式線性回歸模型繼續(xù)探討CHB患者氧化應(yīng)激水平和hepcidin水平之間的關(guān)聯(lián)性；在此基礎(chǔ)上，以乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）穩(wěn)定復(fù)制的HepG2.2.15細胞為研究對象，以骨形態(tài)蛋白6（Bone morphogenetic protein6,BMP6）/SMAD家族成員4（Smad family member4,SMAD4）為靶點，應(yīng)用qRT-PCR、western-blot、細胞免疫

4、熒光等方法檢測hepcidin、BMP6、SMAD4的表達或轉(zhuǎn)位，分析HBV復(fù)制過程中氧化應(yīng)激介導(dǎo)的hepcidin表達變化的潛在信號調(diào)控通路。
　　結(jié)果：
　　1.本部分研究納入28,500名研究對象，兩組的平均年齡為（HBsAg(+)：62.8±7.8vs.HBsAg(-)：64.4±8.5），女性所占百分比為（HBsAg(+)：50.6％vs.HBsAg(-)：56.6%）。和對照組相比較，HBsAg攜帶者膽紅素水平較

5、高（總膽紅素：16.52±7.16vs.14.70±6.07，P<0.001）。
　　2.在HBsAg攜帶者中，膽紅素水平和評價肝損傷嚴重程度指標呈正相關(guān)關(guān)系。將總膽紅素水平按照四分位數(shù)分成四層，校正相關(guān)混雜因素后，研究對象總膽紅素高水平組第四層與最低水平組比較，肝損傷指數(shù)升高的風(fēng)險升高，對應(yīng)的比值比（odds ratios,ORs）和95%置信區(qū)間（95%confidence intervals,95%CIs）是ORs FIB-

6、4（95%CIs）：2.24(95%CIs,1.57-3.21)和ORs APRI（95%CIs）：2.22(95%CIs,1.60-3.08)。
　　3.和間接膽紅素比較，較高水平的直接膽紅素與升高的肝損傷指標的比值比更大，而且在女性、超重或向心型脂肪分布的HBsAg攜帶者中更為顯著。
　　4.本部分研究納入192名研究對象（172名CHB患者與20名對照）。CHB患者血漿hepcidin水平比對照組低，并且隨著肝炎嚴重程

7、度的升高，hepcidin水平逐漸下降。在輕度、中度和重度CHB患者中，血漿hepcidin(ng/mL)水平分別是67.01(41.24，100.53)，38.84(29.61，58.84)和27.54(10.99，47.11)。
　　5.在CHB患者中，單因素分析結(jié)果顯示血漿hepcidin、血清鐵蛋白、血清鐵等指標和CHB疾病嚴重程度之間顯著相關(guān)。降低的hepcidin水平是CHB嚴重程度升高的危險因素，對應(yīng)的ORs（95%

8、CIs）是0.494(0.375，0.652)。進行多因素Logistics回歸分析后發(fā)現(xiàn)，研究對象hepcidin高水平組第四層與最低水平組比較，發(fā)生CHB嚴重程度增加的風(fēng)險降低，對應(yīng)的ORs（95%CIs）是0.215(0.064，0.727)。
　　6.根據(jù)多因素Logistics回歸分析的結(jié)果，本研究計算了可以輔助評價CHB嚴重程度的組合指數(shù)，H-score，其預(yù)測中重度肝炎和重度肝炎的工作曲線下面積分別是0.823（0.

9、755，0.879)，0.797（0.727，0.857）。
　　7.在CHB患者中，本研究發(fā)現(xiàn)隨著血漿MDA水平的升高，hepcidin呈現(xiàn)下降趨勢。將MDA水平進行三分位劃分后，hepcidin濃度分別是41.68（24.82，66.24），48.77（29.74，70.61），26.59（10.94，52.29），P=0.005，呈現(xiàn)下降趨勢，且二者呈負相關(guān)關(guān)系，rho=-0.243，P=0.001。
　　8.進一步使

10、用兩段式線性回歸模型分析，本研究發(fā)現(xiàn)，MDA初步升高時，hepcidin并沒有呈現(xiàn)下降趨勢。但是隨著MDA水平的進一步升高，hepcidin呈現(xiàn)明顯的下降趨勢（β（95%CIs）=-2.80（-3.90，-1.70），P<0.001）。
　　9.與對照相比較，H2O2明顯抑制HBV復(fù)制細胞hepcidin的表達，而這種抑制作用可以被N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）拮抗；同時，H2O2處理降低了BM

11、P6的表達，而且SMAD4在細胞核的表達強度有所減弱；經(jīng)過NAC和BMP6的激活劑處理后，SMAD4在細胞核表達強度接近正常對照組水平；BMP6抑制劑進一步增強H2O2對SMAD4在細胞核表達的抑制作用。
　　結(jié)論：
　　HBsAg攜帶者血清膽紅素水平尤其是直接膽紅素與非侵入性肝損傷指標之間存在明顯的正相關(guān)關(guān)系。CHB患者循環(huán)hepdidin水平與CHB嚴重程度顯著負相關(guān)，而與機體的氧化應(yīng)激水平呈二段式線性關(guān)系。在此過程中，