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文檔簡介
1、原生質(zhì)體再生成植株是一個復(fù)雜的發(fā)育過程,包括細胞壁再生、細胞伸長和分裂,隨后進入細胞周期并再生成胚狀體。這個過程中如果出現(xiàn)逆境,胞內(nèi)會積累不同程度的活性氧(AOS),產(chǎn)生氧化脅迫,影響原生質(zhì)體再生成植株。多胺作為抗氧化劑,能清除細胞中的活性氧,提高抗氧化酶活性,影響細胞發(fā)育。本文探討了從不同材料中所分離的原生質(zhì)體在細胞壁再生期間的差異,以及壁再生過程中,多胺對細胞應(yīng)對氧化脅迫的影響。主要研究結(jié)果如下:
1.對椪柑愈傷組織與
2、葉片酶解、分離原生質(zhì)體,進行液體淺層培養(yǎng),熒光染料Calcofluor White M2R染色觀察不同材料分離原生質(zhì)體細胞壁再生時間,觀察結(jié)果表明,愈傷組織分離的原生質(zhì)體在第3d就開始啟動細胞壁再生程序,到第6d完成細胞壁再生;而葉肉分離的原生質(zhì)體隨著培養(yǎng)時間的延長,逐漸死亡,無法觀察到細胞壁的再生。
2.對愈傷組織與葉片分離的原生質(zhì)體過氧化氫與抗氧化物質(zhì)活力檢測結(jié)果表明,過氧化氫與抗氧化物質(zhì)的活力變化在兩個不同材料分離的
3、原生質(zhì)體中出現(xiàn)了廣泛的差異,隨著培養(yǎng)時間的增加,過氧化氫在不能再生的原生質(zhì)體中逐漸增加,而在能再生的原生質(zhì)體雖然有一定的增加,但是增加幅度明顯少于葉肉分離的原生質(zhì)體中過氧化氫的活力;相應(yīng)的抗氧化酶,在愈傷組織分離的原生質(zhì)體培養(yǎng)過程中都相應(yīng)增加,但是在葉肉分離的原生質(zhì)體培養(yǎng)過程,酶的活力基本保持不變,并有些呈下降的趨勢。
3.添加D-Arg(10mM)處理的愈傷組織分離的原生質(zhì)體,過氧化氫在原生質(zhì)體隨著培養(yǎng)時間逐漸增加,相應(yīng)
4、的細胞體內(nèi)清除酶的活性下降;而在葉肉分離的原生質(zhì)體添加腐胺(10mM),過氧化氫在植物體內(nèi)持續(xù)積累,清除酶的活性變化不明顯。
4.分離椪柑愈傷組織得到原生質(zhì)體,在培養(yǎng)基中添加外源多胺與多胺抑制劑進行培養(yǎng),熒光增白劑染色觀察表明,添加了外源多胺促使原生質(zhì)體細胞壁啟動提前,而添加多胺抑制劑的相對延后。
5.對愈傷組織與葉片進行分離得到原生質(zhì)體培養(yǎng)過程中取樣,通過FDA染色檢測得到,隨著培養(yǎng)時間的增加,愈傷組織分離
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