盾殼霉雙相發(fā)酵過程中污染微生物的分析及其控制.pdf

1、核盤菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]是一種世界性的植物病原真菌,引起很多植物的菌核病。近年來,作物菌核病的生物防治研究引起了國內(nèi)外許多研究者的重視,。盾殼霉(Coniothyrium minitans)是核盤菌的一種重寄生菌,具有防治作物菌核病的潛能,所以,重寄生菌盾殼霉(Coniothyrium minitans)具有廣泛的應(yīng)用前景。將其應(yīng)用于生產(chǎn)實踐的前提條件是制備大量而且有活性的分生

2、孢子。
　　 2009年本實驗室張雄碩士采用液.固雙相發(fā)酵生產(chǎn)盾殼霉(Coniothyriumminitans),篩選出了最優(yōu)的雙相發(fā)酵配方和發(fā)酵條件,可是在雙相發(fā)酵過程中存在著污染的問題。本課題主要是以繆華軍(2004)誘導(dǎo)的盾殼霉抗農(nóng)利靈菌株SV-5-2為發(fā)酵菌株,采用張雄(2009)年優(yōu)化的雙相發(fā)酵配方進(jìn)行發(fā)酵,對其發(fā)酵過程中出現(xiàn)的污染真菌和細(xì)菌微生物進(jìn)行分析控制。實驗結(jié)果如下:
　　 在盾殼霉雙相發(fā)酵過程中分離到

3、7種真菌污染物和10株細(xì)菌污染物,對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子鑒定,鑒定結(jié)果為:2種是根霉屬(Rhizopus sp.)、2種是木霉屬(Trichoderma sp.)、1種是脈胞菌屬(Neurospora sp.)、1種是聚端孢(Trichotheciumsp.)、1種是青霉屬(Penicillium sp.)；7株細(xì)菌是芽孢桿菌屬(Bacillus spp.)、2株細(xì)菌是沙雷氏菌屬(Serratia spp.)、1株細(xì)菌范菌屬(Pantoe

4、a sp.)。
　　 連續(xù)發(fā)酵12個月,總結(jié)真菌污染物的發(fā)生規(guī)律,測真菌污染物對盾殼霉孢子產(chǎn)量的影響。結(jié)果顯示:真菌污染物隨著發(fā)酵季節(jié)的不同呈現(xiàn)一定的規(guī)律:春季發(fā)酵,根霉污染最嚴(yán)重,其次是木霉和皮殼青霉；夏季發(fā)酵,木霉和根霉污染最嚴(yán)重；秋季發(fā)酵,木霉和脈胞菌污染最嚴(yán)重；冬季發(fā)酵,脈胞菌污染最嚴(yán)重。深綠木霉、皮殼青霉、粉紅復(fù)端孢對盾殼霉孢子產(chǎn)量影響最大。
　　 測農(nóng)利靈對7種真菌污染物的EC50。實驗結(jié)果表明:7種真菌對農(nóng)

5、利靈比較敏感,EC50最大值為9.68μg a.i./ml。測7種真菌和盾殼霉菌株SV-5-2在4個不同溫度下的生長速度,低溫下,7種真菌生長速度較慢,高溫下生長速度較快,盾殼霉菌株SV-5-2生長速度變化不明顯。以這兩點為依據(jù),分別采用噴灑農(nóng)利靈和敞開后低溫發(fā)酵的方法防治污染的發(fā)生,均取得了良好的防治效果。
　　 測定細(xì)菌對盾殼霉的拮抗作用,結(jié)果表明:6株芽孢桿菌對盾殼霉的拮抗作用最大,這6株芽孢桿菌的革蘭氏染色均為陽性。陳世