盾殼霉產生的幾丁質酶及其作用研究.pdf

1、盾殼霉(Coniothyrium minitans)是核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)的重寄考真菌和重要生防菌.為了明確盾殼霉寄生核盤菌和抑制核盤菌子囊孢子侵染的機制從而更好地利用盾殼霉資源,該研究開展了對盾殼霉幾丁質酶的產生條件、基本性質、分離純化以及與核盤菌關系等方面的研究.在比較馬鈴薯培養(yǎng)液(mPDB)和一種合成營養(yǎng)液(SMCS)對盾殼霉幾丁質酶產量的基礎上,摸索出了一個盾殼霉產生幾丁質酶的最佳培養(yǎng)基.其

2、配方是:去皮馬鈴薯200g,葡萄糖0.5﹪(w/v),硝酸鉀0.1﹪(w/v),水1000mL,pH為6.5.在這種培養(yǎng)液中接種盾殼霉分生孢子(10<'8>個孢子/50mL培養(yǎng)液),并在20℃下振蕩(200r/min)培養(yǎng)15d可獲得較高的幾丁質酶產量.從多種碳源對盾殼霉幾丁質酶產量的影響來看,用該酶的反應產物(N-乙酰氨基葡萄糖)較其反應底物(幾丁質)能更有效地誘導盾殼霉產生幾丁質酶.在含有草酸(100-3000μg/mL的培養(yǎng)液中,

3、盾殼霉通過生長使培養(yǎng)液的pH值上升至8左右,幾丁質酶的產量明顯提高.采用鹽析透析、陰離子交換層析和凝膠過濾層析等程序對盾殼霉幾丁質酶進行了分離純化.結果表明鹽析透析后可有效沈縮盾殼霉培養(yǎng)液中的幾丁質酶;用Tris-HCl(0.05mol/L,pH8.0)-NaCl(0.8mol/L)為洗脫液,以2mL/min流速洗脫DEAE-SepharoseFF層析柱上的混合蛋白質可較好地分離出幾丁質酶組分.但由于幾丁質酶含量太低,所以采用Sepha