盾殼霉產(chǎn)黑色素相關(guān)基因CmMR1的功能研究.pdf

1、盾殼霉（Coniothyrium minitans）是一種能寄生核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum）菌絲和菌核的重寄生真菌，可用于菌核病的生物防治。盾殼霉菌株ZS-1的T-DNA插入突變體庫(kù)在前期研究中已構(gòu)建，本研究以其中一個(gè)產(chǎn)黑色素缺陷型突變體ZS-1TN24363為材料進(jìn)行了深入研究，主要結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)hiTAIL-PCR克隆到了T-DNA插入位點(diǎn)處的側(cè)翼序列，比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)T-DNA插入破壞了一

2、個(gè)可能的基因。該基因全長(zhǎng)3167 bp，預(yù)測(cè)含有3個(gè)外顯子，2個(gè)內(nèi)含子，編碼一個(gè)含1011個(gè)氨基酸的蛋白。該蛋白N端含有一個(gè)Zn-clus和Med3的保守結(jié)構(gòu)域，C端含有一個(gè)fungal-TF-MHR的保守結(jié)構(gòu)域。進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)該蛋白與Clohesyomyces aquaticus的轉(zhuǎn)錄因子Cmr1蛋白相似性最高，故將該基因命名為CmMR1。
　　2.利用基因敲除技術(shù)獲得了3個(gè)CmMR1基因敲除轉(zhuǎn)化子。敲除轉(zhuǎn)化子和突變體ZS-1T

3、N24363的菌落形態(tài)相似，菌落顯橙色無(wú)黑色素沉積，可產(chǎn)生無(wú)色透明的分生孢子器和分生孢子。CmMR1基因互補(bǔ)可使敲除轉(zhuǎn)化子恢復(fù)產(chǎn)黑色素表型?；駽mMR1對(duì)菌株的生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量、生物學(xué)產(chǎn)量、寄生核盤菌菌絲菌和核的能力、對(duì)高滲的耐受性等均無(wú)明顯影響，但CmMR1的敲除使菌絲中ROS含量增多，抗紫外線能力減弱。
　　3.基因CmMR1的敲除使黑色素合成酶基因Cm4HNR、CmSCD、Cm3HNR、CmLAC的表達(dá)量下調(diào)，證明CmMR