盾殼霉生長(zhǎng)和產(chǎn)孢相關(guān)基因CmTERT的功能研究.pdf

1、盾殼霉是植物病原真菌核盤菌的重寄生菌，在菌核病的生物防治中具有舉足輕重的作用。在前期，實(shí)驗(yàn)室通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化(ATMT)獲得了盾殼霉的T-DNA插入突變體庫(kù)。通過篩選發(fā)現(xiàn)突變體ZS-1TN4685表型異常。通過克隆T-DNA插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列，并將其在盾殼霉基因組中進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)破壞了基因Cm03805。本研究以ZS-1TN4685為研究材料，并對(duì)基因Cm03805的功能進(jìn)行了初步研究，研究結(jié)果如下:
　　1.與野生型ZS-1

2、相比，突變體ZS-1TN4685菌落形態(tài)不規(guī)則，生長(zhǎng)速率下降。在生長(zhǎng)后期，菌落生長(zhǎng)停止，且不能長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿。在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)菌絲尖端彎曲、分枝增多。此外，突變體產(chǎn)孢量下降，但孢子寄生菌核的能力無顯著差別。
　　2.將基因Cm03805在NCBI上進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)該基因含有端粒酶RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶特異性結(jié)構(gòu)域，故將該基因命名為CmTERT?？寺≡摶虬l(fā)現(xiàn)其全長(zhǎng)為4155bp，含有10個(gè)外顯子，9個(gè)內(nèi)含子，編碼1168個(gè)

3、氨基酸。
　　3.通過本地blast比對(duì)，發(fā)現(xiàn)基因CmTERT在盾殼霉基因組中為單拷貝。進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)該蛋白與番茄匍柄霉的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶具有較高的同源性。對(duì)CmTERT的表達(dá)動(dòng)態(tài)分析發(fā)現(xiàn)該基因在分生孢子器形成起始期表達(dá)量高。
　　4.根據(jù)同源重組的原理，對(duì)CmTERT進(jìn)行了基因敲除，獲得了4株該基因的敲除轉(zhuǎn)化子。與野生型ZS-1相比，基因CmTERT的敲除突變體生長(zhǎng)速率降低，菌絲尖端彎曲、分枝增多，生物學(xué)產(chǎn)量降低，菌絲ROS含