灰葡萄孢致病和菌核形成相關(guān)基因功能的初步研究.pdf

1、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）是一種世界分布的死體營(yíng)養(yǎng)型病原真菌，可引起寄主植物發(fā)生灰霉病，寄主范圍十分廣泛?；移咸焰呖尚纬删说挚共涣辑h(huán)境，菌核又可萌發(fā)產(chǎn)生分生孢子進(jìn)行侵染，目前灰霉病缺乏有效的防治措施，明確灰葡萄孢的致病和菌核形成機(jī)理有助于發(fā)展新的防控方法。我們通過RNA seq測(cè)序分析篩選出了在菌核形成階段高表達(dá)的基因BC1G_09891、BC1G_14375、BC1G_12206和BcCVNH。BcCVNH含有一個(gè)

2、保守的CVNH(CyanoVirin-NHomology)保守結(jié)構(gòu)域，BC1G_09891和BC1G_14375屬于MFS（Major FaciltatorSuper family），BC1G_12206為假定蛋白。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明這四個(gè)基因在灰葡萄孢的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)、菌核形成和致病階段均有表達(dá)，BcCVNH基因在致病階段表達(dá)上調(diào)，BC1G_09891、BC1G_14375和BC1G_12206基因在菌核形成階段表達(dá)明顯上調(diào)。利用同源

3、重組方法分別對(duì)這四個(gè)基因進(jìn)行敲除并獲得了相應(yīng)的純合轉(zhuǎn)化子。表型結(jié)果表明敲除BcCVNH不會(huì)影響灰葡萄孢的菌核形成、菌落形態(tài)、菌絲生長(zhǎng)速度和產(chǎn)酸等表型，但BcCVNH敲除轉(zhuǎn)化子的致病力明顯減弱，產(chǎn)孢量降低。敲除基因BC1G_09891對(duì)灰葡萄孢的致病力、菌落形態(tài)、菌核大小、每皿菌核干重和生長(zhǎng)速度等均沒有明顯影響，但菌核形成時(shí)間提前，產(chǎn)孢減少且菌核萌發(fā)率明顯降低。BC1G_14375和BC1G_12206敲除轉(zhuǎn)化子對(duì)灰葡萄孢菌核形成、大小以