髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良髖臼軟骨力學(xué)生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：
　　 發(fā)育性髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良(Developmental dysplasia of the hip，DDH)是小兒矯形外科最常見的疾病之一，常見類型包括髖臼發(fā)育不良及頭臼包容異常。輕度髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良導(dǎo)致成年后的骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)的發(fā)病率很高，大多數(shù)必須進(jìn)行全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)(Total hip arthroplasty，THA)，降低了生活質(zhì)量。目前對(duì)于DDH的微循環(huán)改變和軟骨病理形態(tài)學(xué)改變

2、已有報(bào)道，并認(rèn)為DDH早期發(fā)生了關(guān)節(jié)軟骨退變，但對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的退變機(jī)制及相關(guān)大分子蛋白的表達(dá)、整合素的表達(dá)等力學(xué)生物學(xué)方面的研究尚未見報(bào)告。本研究旨在檢測(cè)與關(guān)節(jié)軟骨退變有關(guān)的膠原與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)等大分子蛋白、整合素力學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)在DDH早期髖臼軟骨中的表達(dá)，探討它們與DDH軟骨退行性變化的相關(guān)性，研究軟骨退變的機(jī)制，為臨床DDH的早期治療提供理論依據(jù)，為進(jìn)一步深入研究DDH、DDH與骨性關(guān)節(jié)炎的關(guān)系提供新思路。
　　

3、 方法：
　　 一、DDH動(dòng)物模型的制作及骨密度、病理組織學(xué)觀察
　　 1.采用目前普遍認(rèn)可的兔伸膝位固定制作DDH動(dòng)物模型的方法，左下肢作為實(shí)驗(yàn)側(cè)，右下肢不作任何處理作為對(duì)照側(cè)，5周后X線證實(shí)建模成功16只。
　　 2.Norland/p-DEXA型骨密度分析儀采用雙能X線技術(shù)測(cè)定髖臼骨礦含量進(jìn)行骨密度檢測(cè)觀察軟骨和骨性結(jié)構(gòu)退變情況，SPSS12.0統(tǒng)計(jì)和比較組間差異。
　　 3.髖臼軟骨標(biāo)本HE常規(guī)染

4、色、甲苯胺藍(lán)特殊染色后光鏡下觀察髖臼軟骨細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的病理組織學(xué)改變。
　　 二、Ⅱ型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7)在DDH髖臼軟骨中的表達(dá)
　　 1.第一部分 DDH模型選用8只髖臼軟骨標(biāo)本。
　　 2.采用免疫組化染色定性檢測(cè)Ⅱ型膠原、MMP-7在髖臼軟骨中表達(dá)的改變。
　　 3.采用Western-blot免疫印跡定量檢測(cè)Ⅱ型膠原蛋白、MMP-7蛋白在髖臼軟骨中表達(dá)的改變，SPSS12.

5、0統(tǒng)計(jì)和比較組間差異。
　　 三、整合素α5β1在DDH髖臼軟骨中的表達(dá)
　　 1.DDH重新建模8只獲取髖臼軟骨標(biāo)本進(jìn)行整合素α5β1 mRNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄。
　　 2.采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)整合素α5β1 mRNA在髖臼軟骨中表達(dá)量的改變。
　　 3.SPSS12.0統(tǒng)計(jì)和比較組間差異。
　　 結(jié)果：
　　 一、DDH動(dòng)物模型的制作及骨密度、病理組織學(xué)觀察
　　 1.建模

6、成功率76.2％(16/21)。
　　 2.骨密度結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組低于對(duì)照組，但統(tǒng)計(jì)分析組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.病理組織學(xué)可見到軟骨退變征象：甲苯胺藍(lán)染色有失染現(xiàn)象，少量軟骨細(xì)胞簇聚現(xiàn)象。
　　 二、Ⅱ型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7)在DDH髖臼軟骨中的表達(dá)
　　 1.實(shí)驗(yàn)組Ⅱ型膠原在軟骨層ECM中不均勻表達(dá)，柱狀細(xì)胞層明顯，細(xì)胞周圍出現(xiàn)環(huán)繞棕色深染，胞漿內(nèi)明顯棕色深染細(xì)胞

7、數(shù)目較對(duì)照組多。Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)量升高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞胞漿內(nèi)MMP-7陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯增多。MMP-7蛋白表達(dá)量升高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 三、整合素α5β1在DDH髖臼軟骨中的表達(dá)
　　 對(duì)照組有整合素α5β1mRNA的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組整合素α5β1的表達(dá)明顯升高，統(tǒng)計(jì)分析組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

8、r>　　 結(jié)論：
　　 1.DDH早期髖臼軟骨出現(xiàn)軟骨退變病理改變，而同期髖臼骨密度降低但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.DDH早期與髖臼軟骨退變有關(guān)的Ⅱ型膠原和MMP-7表達(dá)量增多；Ⅱ型膠原、MMP-7的數(shù)量和強(qiáng)度可能是軟骨退變程度差異的基礎(chǔ)；Ⅱ型膠原、MMP-7作為生物學(xué)指標(biāo)反映關(guān)節(jié)軟骨的退變程度需進(jìn)一步研究論證。
　　 3.DDH早期髖臼軟骨整合素α5β1表達(dá)增多：整合素α5β1可能在髖關(guān)節(jié)力學(xué)傳導(dǎo)中發(fā)揮