應(yīng)用制劑新技術(shù)探索糖尿病血糖控制的實驗研究.pdf

1、糖尿病是一個多病因的綜合病癥，其發(fā)病機制可歸結(jié)為三大方面：①胰島素絕對缺乏；②胰島素相對缺乏；③胰島素效應(yīng)不足（即胰島素抵抗）。因此，糖尿病的對癥治療就是給予外源性的胰島素以降低機體由胰島素不足引起的高血糖癥狀。本課題基于供給機體外源性胰島素的目的，通過異種移植有功能的胰島和構(gòu)建胰島素肺部給藥體系進行糖尿病血糖控制制劑新技術(shù)的應(yīng)用研究，主要結(jié)果如下：
　　 (1)對大鼠胰島細胞分離純化技術(shù)進行了改良，采用GE公司的Ficoll-

2、PaqueTMPLUS溶液和Hanks液兩種密度溶液離心法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的用于胰島細胞分離純化的Ficoll不連續(xù)密度梯度離心法。采用改良技術(shù)每只大鼠收獲的胰島細胞當(dāng)量IEQ值834.80±54.00，是傳統(tǒng)方法的2倍多，且得到的胰島在純度和活率方面都明顯比傳統(tǒng)方法好。
　　 (2)探討了微囊化制備技術(shù)，最終確定了用于制備胰島微囊的最佳條件：成囊電壓4kv，推進速度50mL·h-1，平頭針直徑0.7mm，針頭離液面高度為1.5cm。制

3、備得到的微囊粒徑大小均勻，機械強度、化學(xué)強度較好，囊膜具有一定的通透性，生物相容性好。葡萄糖靜止刺激胰島素釋放試驗結(jié)果顯示，胰島微囊的刺激指數(shù)3.01±0.59高于未微囊化的胰島細胞的2.16±0.30，表明微囊化過程對胰島細胞的生物學(xué)活性無影響，APA微囊為胰島細胞的體外培養(yǎng)和移植提供了良好的環(huán)境。
　　 (3)將有功能的胰島微囊(301EQ/g)異種移植于四氧嘧啶所致的糖尿病小鼠腹腔內(nèi)，通過觀察移植前后動物空腹血糖、糖尿病癥

4、狀改善情況，評價移植系統(tǒng)對糖尿病的治愈效果。結(jié)果顯示移植治療組均無低血糖等不良反應(yīng)的發(fā)生，在不采取任何降血糖方法下，胰島微囊移植組維持糖尿病小鼠的正常血糖水平為15天，而單純胰島細胞移植組的降血糖作用只有3天。
　　 (4)以氫化蛋黃卵磷脂為膜材，探討了四種磷脂脂質(zhì)囊泡的制備工藝，對其處方進行優(yōu)化，初步考察了磷脂脂質(zhì)囊泡的穩(wěn)定性。以乙醇、丙二醇為分散介質(zhì)制得醇質(zhì)體、液態(tài)脂質(zhì)體?；谒姆N磷脂脂質(zhì)囊泡，采用現(xiàn)配現(xiàn)用的方式，即在臨用前

5、加入適量的胰島素水溶液，構(gòu)建的給藥體系穩(wěn)定性較好，且便于貯存。
　　 (5)采用MTT實驗評價四種磷脂脂質(zhì)囊泡的安全性，結(jié)果顯示脂質(zhì)體、脂質(zhì)微泡對細胞的毒性小于醇質(zhì)體和液態(tài)脂質(zhì)體，其中脂質(zhì)體的細胞毒性最小，醇質(zhì)體的細胞毒性最大。以磷脂囊泡為基礎(chǔ)構(gòu)建的四種給藥體系在胰島素肺部給藥的藥效學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，均具有一定的促胰島素腫內(nèi)吸收的作用，降血糖強度的依次為：脂質(zhì)微泡(60.81％)＞液態(tài)脂質(zhì)體(38.73％)＞醇質(zhì)體(38.12％)＞

6、脂質(zhì)體(34.97％)。達到最低血糖下降率值的時間依次為：液態(tài)脂質(zhì)體(3h)＜脂質(zhì)微泡(4h)＜醇質(zhì)體(5h)＜脂質(zhì)體(6h)。肺部給藥制劑組（INS溶液、INS-PUM組、INS-LLIP組、INS-LIP組、INS-ETH組）相對于1IU/kg胰島素皮下注射組的藥理相對生物利用度分別為29.09％、48.58％、35.56％、32.91％、33.28％，結(jié)果顯示以脂質(zhì)微泡構(gòu)建的胰島素肺部給藥體系可顯著提高其胰島素肺部給藥的生物利用度