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文檔簡介
1、本文選取當(dāng)前市場銷售的品質(zhì)、價格不一的10種海參,提取分離其多糖,從化學(xué)組成、波譜分析以及酸解寡糖組分分析三個角度分析比較了10種海參多糖。建立并優(yōu)化了應(yīng)用柱前衍生高效液相色譜測定海產(chǎn)動物多糖單糖組成的方法,同時測定糖醛酸、氨基糖和中性單糖。本方法快速、準(zhǔn)確,應(yīng)用性強(qiáng),解決了當(dāng)前海產(chǎn)動物中多糖、單糖組成測定繁瑣、易受干擾的問題。 海參多糖提取采用酶解、乙醇沉淀和季胺鹽沉淀法;分子量測定采用高效凝膠過濾色譜法;化學(xué)組成分析分別采用
2、傳統(tǒng)化學(xué)法和柱前衍生高效液相色譜法,并進(jìn)行結(jié)果比較;硫酸基的取代位點(diǎn)采用紅外波譜和核磁共振波譜測定;水解寡糖采用稀硫酸水解法進(jìn)行,酸解寡糖化學(xué)分析采用薄層層析色譜和高效液相色譜進(jìn)行。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),10種海參多糖在化學(xué)組成上差異明顯。多糖得率以中國產(chǎn)日本刺參為最高,達(dá)7.16%,以日本刺參為最低,僅為1.31%。所得10種海參多糖分子量集中在三大區(qū)域:大于70萬,16-25萬以及0.5-1.2萬。Black teat多糖、北極海
3、參多糖、冰島刺參多糖、挪威紅參多糖以及日本刺參多糖主要組分的分子量為16-25萬,其余5種海參多糖主要組分的分子量大于70萬。10種海參多糖總糖、蛋白、硫酸基、糖醛酸和氨基糖含量的波動范圍分別為40.33%-62.11%,0.44%-19.48%,19.54%-29.95%,9.85%-13.38%和4.92%-10.18%。中性單糖測定表明10種海參多糖均含有巖藻糖和半乳糖,部分含有甘露糖和葡萄糖,且?guī)r藻糖含量很高。10種海參多糖在陰
4、離子交換樹脂色譜柱上的洗脫曲線明顯不同,除仿刺參多糖和日本刺參多糖外,其余8種海參多糖均在鹽濃度為3.2 mol/L的洗脫條件下洗脫完全。 柱前衍生高效液相色譜法采用2 mol/L TFA,110℃,8h的水解條件,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生,ZORBAX Eclipse XDB-C18分離柱分離,紫外檢測法對10種海參多糖進(jìn)行單糖組成分析。其對中性和堿性單糖組成的測定結(jié)果和傳統(tǒng)化學(xué)法測定結(jié)果基本一致,但對糖
5、醛酸的測定,傳統(tǒng)化學(xué)法測定結(jié)果明顯偏高,液相色譜法的測定結(jié)果較為準(zhǔn)確。將液相色譜法推廣至羊棲菜多糖、魷魚墨多糖、鯊魚軟骨多糖、鯊魚魚翅多糖以及褐藻膠等多種海產(chǎn)動植物多糖單糖組成的測定,結(jié)果令人滿意。紅外波譜表明,10種海參多糖均含有羥基、羧基、乙酰胺基、硫酸基以及巖藻糖的甲基,且不同海參多糖硫酸基的取代位點(diǎn)不同。菲律賓刺參多糖、中國產(chǎn)日本刺參多糖、Sand Fish多糖、Black Teat多糖、北極海參多糖以及墨西哥刺參多糖的硫酸基取
6、代位點(diǎn)是巖藻糖的C-4位或氨基半乳糖的C-4位;冰島刺參多糖和美國肉參多糖的硫酸根取代位點(diǎn)可能在巖藻糖的C-4位或氨基半乳糖的C-2位或C-4位;而挪威紅參多糖和日本刺參多糖則可能在巖藻糖的C-2位、C-3位、C-4位或者是氨基半乳糖的C-4位或C-6位存在硫酸根取代情況。核磁共振波譜印證了紅外波譜的信息,同時給出雙硫酸根取代和未經(jīng)硫酸根取代巖藻糖的<'1>H化學(xué)位移信號。除Sand Fish多糖外,其他海參多糖均存在C-2、C-4位雙
7、硫取代巖藻糖,而C-3、C-4位雙硫取代巖藻糖只存在于菲律賓刺參多糖、SandFish多糖、Black teat多糖、北極海參多糖、冰島刺參多糖以及日本刺參多糖中。除挪威紅參多糖、美國肉參多糖和墨西哥刺參多糖之外,其余7種海參多糖均含有未經(jīng)硫酸化的巖藻糖。 酸解海參多糖的最佳條件為0.05mol/L H<,2>SO<,4>,80℃,水浴18h。所得10種海參寡糖經(jīng)薄層層析色譜分離得到4-7個寡糖組分,北極海參多糖、美國肉參多糖、
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