PRGD-PDLLA-β-TCP-NGF復(fù)合材料對(duì)PC12細(xì)胞分化相關(guān)基因的調(diào)控.pdf

1、大量研究表明神經(jīng)導(dǎo)管中添加神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)組分能夠明顯促進(jìn)受損神經(jīng)的形態(tài)和功能恢復(fù)。用生物相容性良好，體內(nèi)降解性能優(yōu)異的材料作為基材復(fù)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子是常用的緩釋體系制備方法。本實(shí)驗(yàn)即利用自行設(shè)計(jì)的RGD接枝的聚(羥基乙酸-L-賴(lài)氨酸-乳酸)高分子材料，復(fù)合β-磷酸三鈣、聚乳酸作為緩釋基材，在有機(jī)溶劑中物理混合NGF凍干粉制得NGF緩釋材料(PRGD/PDLLA/β-TCP/NGF)。本論文主要研究RGD復(fù)合材料緩釋的NGF對(duì)PC1

2、2分化相關(guān)基因的調(diào)控。
　　 在體外實(shí)驗(yàn)中，分別采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定材料浸提液中NGF的含量，并通過(guò)用第1天浸提液誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化，測(cè)量PC12細(xì)胞最大直徑、最長(zhǎng)突起長(zhǎng)度和突起數(shù)目來(lái)觀(guān)察其形態(tài)學(xué)上的變化。研究結(jié)果顯示：RGD復(fù)合材料中NGF的釋放分為兩個(gè)階段-擴(kuò)散階段和降解階段；材料在第1天出現(xiàn)NGF的暴釋?zhuān)?天浸提液中NGF的濃度約為407.26ng/ml。將第1天浸提液稀釋到100ng/ml NGF濃度

3、處理PC12細(xì)胞3天，形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示細(xì)胞最大直徑、最長(zhǎng)突起長(zhǎng)度和突起數(shù)目與對(duì)照組細(xì)胞存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，出現(xiàn)明顯分化。
　　 分別用第1天浸提液處理PC12細(xì)胞1天，2天，3天，收集細(xì)胞提取總RNA樣品，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Q-PCR)實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)PC12細(xì)胞中與分化相關(guān)的TrkA，Rab-1，VGF，GAP43和β-TubulinⅡ基因mRNA表達(dá)隨時(shí)間的變化規(guī)律。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各基因mRNA表達(dá)量大量提高，其峰值出現(xiàn)在