冰溫?；顥l件下縊蟶優(yōu)勢(shì)腐敗菌生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)及耐冷機(jī)制研究.pdf

1、本研究主要以縊蟶為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，綜合分析了生態(tài)冰溫?；罴夹g(shù)對(duì)縊蟶新鮮度品質(zhì)的影響，應(yīng)用Illumina Miseq高通量測(cè)序的方法研究了縊蟶冰溫?；钸^(guò)程中菌相動(dòng)態(tài)變化，并以鑒定得到的優(yōu)勢(shì)腐敗菌——假單胞菌(Pseudomonas spp.)為研究對(duì)象，建立和驗(yàn)證了不同溫度條件下假單胞菌的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)模型。應(yīng)用iTRAQ結(jié)合多維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（2D LC-MS/MS）分析了冰溫?；钸^(guò)程中縊蟶蛋白質(zhì)組變化，通過(guò)生物信息學(xué)分析，對(duì)與縊蟶耐冷機(jī)

2、制密切相關(guān)的蛋白和通路進(jìn)行了篩選。主要結(jié)果如下:
　　1.縊蟶的生態(tài)冰溫區(qū)約為-1.9～1.5℃，此溫度區(qū)間可應(yīng)用于縊蟶的?；钛芯?，-1.5℃溫度條件下冰溫保活可將縊蟶的?；钇谘娱L(zhǎng)至11d。分別從感官評(píng)價(jià)、理化評(píng)價(jià)和微生物評(píng)價(jià)等方面，研究不同?；顪囟龋?1.5、10、20℃）對(duì)于縊蟶新鮮度品質(zhì)的影響。結(jié)果表明:-1.5℃冰溫?；羁O蟶效果最好，能夠客觀評(píng)價(jià)縊蟶新鮮度品質(zhì)的主要指標(biāo)是感官評(píng)分、TVB-N、K'值、質(zhì)構(gòu)（硬度、彈性、粘性

3、）和細(xì)菌總數(shù)，pH值可以作為評(píng)價(jià)縊蟶品質(zhì)的一個(gè)參考指標(biāo)。
　　2.縊蟶初始菌相中，優(yōu)勢(shì)菌為弓形桿菌（Arcobacter spp.）、擬桿菌科未分類屬和Psychrilyobacter spp.，比例分別為16.2％、8.4％和7.2％。?；钇诮K點(diǎn)時(shí)，假單胞菌數(shù)目明顯增多，成為優(yōu)勢(shì)腐敗菌，所占比例為26.2％。次優(yōu)勢(shì)菌為弧菌科未分類屬、嗜冷單胞菌（Psychromonas spp.）、弓形桿菌和Psychrilyobacter s

4、pp.，比例分別為17.8％、14.4％、13％和11.8％。修正的Gompertz模型能夠有效擬合低溫(-1.5～15.0℃)條件下假單胞菌的生長(zhǎng)，所得的相關(guān)系數(shù)R2均在0.98以上，偏差度和準(zhǔn)確度均在可接受范圍之內(nèi)。采用平方根模型擬合溫度與最大比生長(zhǎng)速率μmax、溫度與延滯時(shí)間λ的關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.963和0.970，線性關(guān)系良好，建立的Gompertz模型可對(duì)-1.5～15.0℃溫度范圍內(nèi)假單胞菌的生長(zhǎng)進(jìn)行預(yù)測(cè)。

5、　　3.iTRAQ共鑒定得到縊蟶冰溫?；钪胁町惐磉_(dá)蛋白27種，其中上調(diào)蛋白4種，下調(diào)蛋白23種。對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行GO功能分類，發(fā)現(xiàn)其主要與縊蟶的能量代謝、應(yīng)激反應(yīng)、DNA復(fù)制和蛋白質(zhì)合成有關(guān)。對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行KEGG通路富集分析，發(fā)現(xiàn)其顯著富集的通路為MAPK信號(hào)通路、卵母細(xì)胞減數(shù)分裂和長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)。篩選得到的可能與冰溫縊蟶耐冷機(jī)制相關(guān)的通路有:MAPK信號(hào)通路、氧化磷酸化、TCA循環(huán)、鈣信號(hào)通路、淀粉和蔗糖代謝、氨基糖和核苷酸糖代謝