SB203580對脾臟樹突狀細胞介導的OT-Ⅱ細胞增殖及分化的影響.pdf

1、研究背景：CD4+T細胞功能失常導致的免疫性疾病發(fā)病率逐年增加，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、潰瘍性腸炎等。CD4+T細胞功能異常有多種誘因，抗原提呈細胞是最主要因素。樹突狀細胞是目前已知最主要的抗原提呈細胞，能夠吞噬抗原，加工處理，將抗原信息提呈給T、B細胞，從而激活機體的免疫應(yīng)答。p38MAPK信號通路作為MAPK信號通路的一個重要分支，調(diào)控細胞的生長、活化、增殖和凋亡。SB203580是p38 MAPK的特異性抑制劑，抑制其信號轉(zhuǎn)導。本文將研

2、究SB203580對樹突狀細胞的表型和功能的影響及可能機制。
　　目的：探討阻斷p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信號通路對脾臟樹突狀細胞（DC）介導的CD4+-雞卵清蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠T（OT-Ⅱ）細胞增殖和分化的影響。
　　方法：
　　1.應(yīng)用CD11c+免疫磁珠分選C57BL/6小鼠脾臟中DC。
　　2.應(yīng)用CD4+分離試劑盒從OT-Ⅱ轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟中分選出OT-Ⅱ細胞。
　　3.采用流式細胞術(shù)

3、檢測DC表面共刺激分子（CD80、CD86、CD40）、MHCⅡ分子的表達。
　　4.流式細胞術(shù)檢測DC提呈組織相容性復合體Ⅱ類分子Eα鏈第52~68位抗原肽（Eα52-68）的能力。
　　5.ELISA法及實時熒光定量PCR檢測DC腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素1α（IL-1α）、IL-6、轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）的蛋白水平和mRNA水平。
　　6.流式細胞術(shù)檢測DC介導的OT-Ⅱ細胞增殖及Th1/Th2/T

4、h17和抑制性細胞比例。
　　結(jié)果：
　　1.經(jīng)磁珠分選后獲得了較高純度的DC（>90％）。
　　2.經(jīng)分選試劑盒分選后獲得叫高純度的OT-Ⅱ細胞（>90%）。
　　3.SB203580降低DC表面CD80、CD86、CD40、MHC-Ⅱ的表達。
　　4.SB203580抑制DC的抗原提呈反應(yīng)。
　　5.SB203580使DC細胞的TNF-α、IL-1α、IL-6表達下調(diào)，TGF-β表達上調(diào)。