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文檔簡介
1、研究背景:CD4+T細(xì)胞功能失常導(dǎo)致的免疫性疾病發(fā)病率逐年增加,如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、潰瘍性腸炎等。CD4+T細(xì)胞功能異常有多種誘因,抗原提呈細(xì)胞是最主要因素。樹突狀細(xì)胞是目前已知最主要的抗原提呈細(xì)胞,能夠吞噬抗原,加工處理,將抗原信息提呈給T、B細(xì)胞,從而激活機(jī)體的免疫應(yīng)答。p38MAPK信號(hào)通路作為MAPK信號(hào)通路的一個(gè)重要分支,調(diào)控細(xì)胞的生長、活化、增殖和凋亡。SB203580是p38 MAPK的特異性抑制劑,抑制其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。本文將研
2、究SB203580對(duì)樹突狀細(xì)胞的表型和功能的影響及可能機(jī)制。
目的:探討阻斷p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信號(hào)通路對(duì)脾臟樹突狀細(xì)胞(DC)介導(dǎo)的CD4+-雞卵清蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠T(OT-Ⅱ)細(xì)胞增殖和分化的影響。
方法:
1.應(yīng)用CD11c+免疫磁珠分選C57BL/6小鼠脾臟中DC。
2.應(yīng)用CD4+分離試劑盒從OT-Ⅱ轉(zhuǎn)基因小鼠脾臟中分選出OT-Ⅱ細(xì)胞。
3.采用流式細(xì)胞術(shù)
3、檢測DC表面共刺激分子(CD80、CD86、CD40)、MHCⅡ分子的表達(dá)。
4.流式細(xì)胞術(shù)檢測DC提呈組織相容性復(fù)合體Ⅱ類分子Eα鏈第52~68位抗原肽(Eα52-68)的能力。
5.ELISA法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測DC腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素1α(IL-1α)、IL-6、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)的蛋白水平和mRNA水平。
6.流式細(xì)胞術(shù)檢測DC介導(dǎo)的OT-Ⅱ細(xì)胞增殖及Th1/Th2/T
4、h17和抑制性細(xì)胞比例。
結(jié)果:
1.經(jīng)磁珠分選后獲得了較高純度的DC(>90%)。
2.經(jīng)分選試劑盒分選后獲得叫高純度的OT-Ⅱ細(xì)胞(>90%)。
3.SB203580降低DC表面CD80、CD86、CD40、MHC-Ⅱ的表達(dá)。
4.SB203580抑制DC的抗原提呈反應(yīng)。
5.SB203580使DC細(xì)胞的TNF-α、IL-1α、IL-6表達(dá)下調(diào),TGF-β表達(dá)上調(diào)。
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