針刺對(duì)急性離心運(yùn)動(dòng)引起的骨骼肌胞漿和線粒體中Ca2+濃度變化的影響.pdf

1、1實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　本實(shí)驗(yàn)通過觀察斜刺對(duì)一次急性離心運(yùn)動(dòng)骨骼肌損傷模型大鼠線粒體及胞漿中Ca2+含量、血清CK、骨骼肌組織中MPO和肌力的影響，探討針刺促進(jìn)骨骼肌損傷修復(fù)的作用機(jī)制。
　　2實(shí)驗(yàn)方法：
　　實(shí)驗(yàn)一：96只雄性Wista r大鼠隨機(jī)分為4組：安靜對(duì)照組（C，n=8）、運(yùn)動(dòng)組（E，n=40）、運(yùn)動(dòng)針刺組（EA，n=40）與運(yùn)動(dòng)針刺阻斷劑組（EAI，n=40）。采用-16°下坡跑90min建立一次性急性離心運(yùn)動(dòng)

2、模型。運(yùn)動(dòng)針刺組采用阿是穴斜刺干預(yù)，運(yùn)動(dòng)針刺阻斷劑組采用針刺聯(lián)合GdCl3注射干預(yù)，安靜組和運(yùn)動(dòng)組不干預(yù)。分別于運(yùn)動(dòng)后6 h、24 h、48 h、72 h、120 h對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行股四頭?。ㄖ饕獮楣芍虚g肌和股內(nèi)肌）損傷部位取材，檢測(cè)骨骼肌線粒體中Ca2+含量；檢測(cè)骨骼肌肌肉組織中MPO、血清CK含量。
　　實(shí)驗(yàn)二：24只雄性Wista r大鼠隨機(jī)分成4組：安靜對(duì)照組（C，n=6）、電刺激組（E，n=6）、電刺激針刺組（EA，n=6

3、）、電刺激針刺阻斷劑組（EAI，n=6）。采用電刺激大鼠斜方肌建立過度離心運(yùn)動(dòng)損傷模型。活體大鼠暴露斜方肌，拉長后進(jìn)行電刺激，肌肉收縮（過程相當(dāng)于離心運(yùn)動(dòng)）。電刺激采用，波寬700 ms；電壓8 V；頻率100 Hz；每次電刺激3 s，50次（即150s為一組）；刺激一次后休息5 min，共測(cè)10組。
　　安靜組不進(jìn)行電刺激。電刺激組進(jìn)行電刺激；電刺激針刺組于刺激結(jié)束后進(jìn)行針刺（用直徑0.25 mm毫針刺斜方肌，留針4min）；電

4、刺激針刺阻斷劑組于刺激結(jié)束后進(jìn)行針刺。所有組在刺激進(jìn)行試劑孵育并記錄肌張力變化。
　　取活體斜方肌拍攝肌肉組織 Ca2+熒光圖片，取離體斜方肌線粒體 Ca2+的測(cè)定。
　　3實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一
　　3.1不同組別大鼠血清中CK活性，與對(duì)照組相比，E組24 h有顯著增加，有極顯著性差異（P＜0.001）；48 h時(shí)有非常顯著性差異（P＜0.01），120 h降至安靜組水平；EA組24h達(dá)到峰值，且有顯著性差異（

5、P＜0.05），48 h至120h一直下降至安靜組水平；EAI組，6 h即有非常顯著性差異（P＜0.01），24 h、48 h、120 h有極顯著性差異（P＜0.001），120 h雖然下降，但高于E和EA組。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，EA、EAI與運(yùn)動(dòng)組相比，24 h EA和48 h EA與其有顯著性差異（P＜0.05），6 h EAI和48 h EAI與其有顯著性差異（P＜0.05）。EAI與EA相比，在24 h有顯著性差異（P＜0.05），在6

6、 h和120 h有非常顯著性差異（P＜0.01），在48 h和72 h有極顯著性差異（P＜0.001）。EA與EAI組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，除24 h有顯著性差異外（P＜0.05），都有非常顯著性差異（P＜0.01）。
　　3.2不同組別大鼠股中間肌髓過氧化物酶濃度，與對(duì)照組相比，6 h EAI、6 h E、24 h E、24 h EAI和72 h EAI有顯著性差異（P＜0.05）；48 h EAI有非常顯著性差異（P＜0.01）；6

7、 h EA有極顯著性差異（P＜0.001）。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，其他組與運(yùn)動(dòng)組相比，24 h EA和72 h EAI有顯著性差異（P＜0.05）；6 h EA和48 h EAI有非常顯著性差異（P＜0.01）。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，EA與EAI相比，在48 h有非常顯著性差異（P＜0.01），在72 h有顯著性差異（P＜0.05）。各組別在120 h基本恢復(fù)正常水平。
　　3.3不同組別大鼠股四頭肌線粒體中游離Ca2+，與對(duì)照組相比，24 h

8、EA和24 h EAI有顯著性差異（P＜0.05）；24 h EA和48 h EAI有非常顯著性差異（P＜0.01）；6 h EA有極顯著性差異（P＜0.001）。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，其他組與運(yùn)動(dòng)組相比，48 h EAI有顯著性差異（P＜0.05）；6 h EA有極顯著性差異（P＜0.001）。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，EA與EAI相比，在6 h有非常顯著性差異（P＜0.01），在48 h有顯著性差異（P＜0.05）。各組別呈先上升后下降趨勢(shì)，在120

9、h基本恢復(fù)正常水平，但是其峰值出現(xiàn)的時(shí)間E、EA、EAI分別出現(xiàn)在24 h、6 h和48 h，且峰值大小為EA＞E＞EAI。
　　實(shí)驗(yàn)二
　　3.1鈣離子熒光圖片顯示，對(duì)照組（C）中，肌纖維熒光強(qiáng)度較弱，肌纖維在灰度圖像下不明顯，胞漿中無明顯熒光。電刺激組（E），肌纖維明顯，且胞漿中熒光很強(qiáng)，可視區(qū)域內(nèi)大部分肌纖維很多具有較強(qiáng)熒光，且有零星熒光亮點(diǎn)。電刺激針刺組（EA），大部分肌纖維熒光強(qiáng)度降低，且熒光亮點(diǎn)很多。運(yùn)動(dòng)針刺加阻

10、斷劑組（ EA I），肌纖維明顯，單根肌纖維熒光較強(qiáng)。熒光圖片平均灰度值顯示，不同組別大鼠斜方肌胞漿中游離鈣離子濃度，與對(duì)照組相比，E有極顯著性差異（P＜0.001）；與E相比，EA與 EAI有非常顯著性差異（P＜0.01）。
　　3.2大鼠斜方肌線粒體中游離鈣離子濃度，與對(duì)照組相比 EA有非常顯著性差異（P＜0.01）；與 E相比，EA有非常顯著性差異（P＜0.01）；與 EA相比，EAI有非常顯著性差異（P＜0.01）。

11、>　　3.3大鼠斜方肌肌張力，與對(duì)照組相比，電刺激90 min后，E、EAE、AI均有非常顯著性差異（P＜0.01）；100 min時(shí)E、EAI有顯著性差異（P＜0.05）。100 min時(shí)，與E相比，EA有顯著性差異（P＜0.05）；與EA相比，EAI有顯著性差異（P＜0.05）。
　　4結(jié)論：
　　4.1離心收縮運(yùn)動(dòng)引起骨骼肌胞漿Ca2+的升高，血清CK活性升高，中性粒細(xì)胞產(chǎn)物MPO活性升高。
　　4.2針刺可有效