非侵入性治療方式對動脈瘤壁退行性改變影響的基礎(chǔ)研究.pdf

1、背景：
　　顱內(nèi)動脈瘤（cerebral aneurysms,CAs）破裂是蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage,SAH）的主要原因，其致殘率、致死率極高。目前未破裂CAs的主要治療手段是顯微手術(shù)夾閉和/或血管內(nèi)栓塞。目前臨床上尚沒有安全有效的非侵入性治療藥物。最近的研究表明內(nèi)皮功能障礙或損傷，及巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的慢性炎癥在CAs形成和進(jìn)展破裂過程中發(fā)揮著重要作用。我們前期臨床研究表明，內(nèi)皮祖細(xì)胞（endoth

2、elial progenitor cells,EPCs）循環(huán)水平下降和功能受損與CAs的形成密切相關(guān)。基于此，我們猜測調(diào)控血管炎癥和受損的循環(huán)EPCs水平可能會對CAs進(jìn)展起到一定的保護(hù)作用。
　　目的：
　　(1)探討阿司匹林(aspirin)對動脈瘤性血管重塑退化的影響，并闡明其可能的作用機(jī)制。
　　(2)探討靜脈移植臍血源性內(nèi)皮集落形成細(xì)胞（endothelial colony-forming cells,ECF

3、Cs）對動脈瘤性血管重塑退化的影響，并闡明其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　(1)7周齡雄性Sprague–Dawley（SD）大鼠（n=20/組）隨機(jī)分為正常大鼠組，CA組和CA+aspirin組。采用無創(chuàng)鼠尾血壓檢測法檢測大鼠在未麻醉狀態(tài)下的血壓值。深麻醉成功后，取血檢測循環(huán)CD34+CD133+EPCs水平、血小板凝集率和血小板計(jì)數(shù)。剝離右側(cè)大腦前動脈/嗅動脈（right anterior cerebral arte

4、ry/olfactory artery，ACA/OA）分叉部血管，行Verhoeff VanGieson染色對CAs形態(tài)學(xué)表現(xiàn)進(jìn)行評估。行免疫組織化學(xué)染色評估瘤壁內(nèi)CD68+巨噬細(xì)胞的浸潤情況。行RT-PCR檢測瘤壁內(nèi)MMP-2，MMP-9，TIMP-1，NF-κB，MCP-1和VCAM-1的表達(dá)水平。
　　(2)7周齡雄性SD大鼠（n=30/組）隨機(jī)分為正常大鼠組，CA+saline組和CA+ECFCs移植組。血壓值和右側(cè)ACA

5、/OA分叉部血管形態(tài)學(xué)表現(xiàn)按照方法(1)中描述進(jìn)行評估。行免疫組織化學(xué)染色評估瘤壁內(nèi)CD68+巨噬細(xì)胞浸潤和平滑肌細(xì)胞（smooth muscle cells，SMCs）凋亡情況。行RT-PCR檢測瘤壁內(nèi)MMP-2，MMP-9，TIMP-1，NF-κB，MCP-1，VCAM-1，eNOS，Bcl-2和iNOS的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　(1)CAs誘導(dǎo)術(shù)后2個月，ACA/OA分叉處表現(xiàn)出動脈瘤性血管壁退行性改變，主要表現(xiàn)為

6、內(nèi)彈力層（internal elastic lamia，IEL）退化崩解斷裂、管壁中層變薄、瘤腔變大向外側(cè)膨出，aspirin干預(yù)治療抑制了以上這些血管壁退行性改變，而沒有對手術(shù)誘導(dǎo)的高血壓值產(chǎn)生影響。aspirin促使 EPCs動員入外周血，使受損的CD34+CD133+EPCs循環(huán)水平恢復(fù)接近正常水平。Aspirin降低了血小板凝集率，但并沒有改變血小板的數(shù)量。Aspirin下調(diào)了炎癥因子NF-κB、MCP-1和VCAM-1表達(dá)水平

7、。Aspirin抑制了CD68+巨噬細(xì)胞向血管壁的入侵，同時伴隨著MMP-2和MMP-9表達(dá)下調(diào)和TIMP表達(dá)上調(diào)。
　　(2)與CA+saline組大鼠相比，CA+ECFCs移植組大鼠右側(cè)ACA/OA分叉處血管壁動脈瘤性退行性改變顯著減輕，主要表現(xiàn)為IEL退化崩解斷裂、管壁中層變薄及瘤腔變大向外側(cè)膨出程度減輕，而手術(shù)誘導(dǎo)的高血壓值沒有產(chǎn)生任何變化。ECFCs移植下調(diào)了炎癥因子NF-κB和VCAM-1的表達(dá)水平，上調(diào)了eNOS m

8、RNA的表達(dá)水平，但并有改變MCP-1的表達(dá)水平，同時伴隨著CD68+巨噬細(xì)胞瘤壁浸潤程度的下降。ECFCs移植通過下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)并上調(diào)TIMP表達(dá)，抑制了MMPs介導(dǎo)的血管壁破壞作用。而且ECFCs移植還顛覆了Bcl-2的表達(dá)下調(diào)和iNOS的表達(dá)上調(diào)，同時還減少了SMCs凋亡。
　　結(jié)論：
　　(1)本部分研究結(jié)果表明，aspirin通過動員EPCs，減弱巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的慢性血管炎癥和動脈壁重塑對動脈瘤性血