SPR生物傳感器檢測(cè)類胰蛋白酶在過敏性休克死亡豚鼠體內(nèi)含量變化.pdf

1、研究背景：
　　過敏性休克是外界某些抗原性物質(zhì)進(jìn)入已致敏的機(jī)體后，通過免疫機(jī)制在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生的一種強(qiáng)烈的多臟器累及癥群，嚴(yán)重者迅速進(jìn)入休克狀態(tài)，如不及時(shí)搶救，?？稍?-10 min內(nèi)死亡。由于其常規(guī)尸體檢驗(yàn)無(wú)特異性病理改變，一直給法醫(yī)學(xué)鑒定造成很大困擾。機(jī)體初次接觸變應(yīng)原時(shí)產(chǎn)生特異性IgE，IgE吸附于肥大細(xì)胞表面，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體再次接觸變應(yīng)原時(shí)，變應(yīng)原即與肥大細(xì)胞表面IgE結(jié)合，引起肥大細(xì)胞活化并釋放生物活性介質(zhì)，這

2、是引起過敏性休克的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，過敏介質(zhì)包括組胺，激肽原酶，LTs，PAF等，但是這些活性介質(zhì)半衰期只有幾秒到幾分鐘，且在死后極其不穩(wěn)定。類胰蛋白酶是肥大細(xì)胞脫顆粒時(shí)釋放的一種特異性蛋白，其半衰期長(zhǎng)，大于1h，死后穩(wěn)定。我國(guó)正常人血清類胰蛋白酶的含量平均值為2.24 ng/mL，其中大多數(shù)人血清檢測(cè)不到類胰蛋白酶，有研究表明:不同國(guó)家人血清類胰蛋白酶濃度略有差異，一般認(rèn)為正常人血清類胰蛋白酶的濃度不超過5ng/mL，而過敏性休克死者血清類胰

3、蛋白酶含量可以達(dá)到正常人的幾十倍。國(guó)內(nèi)外已有學(xué)者應(yīng)用放射免疫法、免疫組化法、ELISA等方法檢測(cè)尸體血中類胰蛋白酶的含量來(lái)診斷過敏性休克。
　　目的
　　應(yīng)用表面等離子共振(SPR)技術(shù)檢測(cè)過敏性休克死亡豚鼠血清類胰蛋白酶，試圖為過敏性休克死亡提供客觀診斷依據(jù)。分析兩種不同SPR分析方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
　　方法：
　　本研究選擇健康豚鼠作為動(dòng)物模型。首先，將16只健康豚鼠隨機(jī)均分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組再分為死

4、亡即時(shí)組和冷凍3d組。以人混合血清誘發(fā)動(dòng)物過敏性休克致死。分別于實(shí)驗(yàn)組死亡即時(shí)組豚鼠死后3h、5h、10h、20h取血，采用分子自組裝方法將抗類胰白酶單克隆抗體(Anti-TPSAB1)固定在SPR生物傳感器芯片表面，檢測(cè)豚鼠血清中類胰蛋白酶。采用通入方式和滴定方式兩種不同的方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組死亡即時(shí)組豚鼠血清類胰蛋白酶。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)組豚鼠血清類胰蛋白酶的SPR響應(yīng)值比對(duì)照組顯著升高，冷凍3d組豚鼠血清類胰蛋白酶的SP

5、R響應(yīng)值與死亡即時(shí)組豚鼠血清類胰蛋白酶的SPR響應(yīng)值無(wú)明顯差別，說(shuō)明在冷凍3d的條件下對(duì)豚鼠血清類胰蛋白酶的表達(dá)無(wú)明顯影響。實(shí)驗(yàn)組死亡即時(shí)組豚鼠死后3h、5h、10h、20h血清類胰蛋白酶無(wú)明顯變化，說(shuō)明死亡3h、5h、10h、20h左右不影響豚鼠血清類胰蛋白酶表達(dá)。分別以通入方式和滴定方式檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組死亡即時(shí)組豚鼠血清類胰蛋白酶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)明顯差異，說(shuō)明兩種方法均可以用來(lái)檢測(cè)血清類胰蛋白酶。
　　結(jié)論：
　　基于SPR生物傳