羅希土堿通過PI3K-mTOR-PPARγ途徑降低巨噬細(xì)胞LPL表達(dá)及脂質(zhì)蓄積.pdf

1、[目的]動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，已成為我國首位人口死亡原因之一。動(dòng)脈壁脂質(zhì)沉積、泡沫細(xì)胞形成等，在As的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）是水解血漿中乳糜微粒（chylomicron，CM）、極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL）等脂蛋白中甘油三酯的關(guān)鍵酶，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮著重要作用。動(dòng)脈壁中巨噬細(xì)胞分

2、泌的LPL具有促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的作用，導(dǎo)致泡沫細(xì)胞的形成及動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。羅希土堿（rohitukine，RH），是一種色原酮類生物堿，具有抗癌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)的等生物活性，最新研究顯示，其具有抑制脂肪細(xì)胞分化的作用。本研究目的在于探討羅希土堿對(duì)巨噬細(xì)胞LPL的表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的影響。
　　[方法]RAW264.7巨噬細(xì)胞經(jīng)不同濃度（0,5,10,20 uM）羅希土堿處24h及20uM羅希土堿處理不同時(shí)間（0,12

3、,24,48h）后，Western blot檢測(cè)LPL蛋白水平，RT-PCR檢測(cè)LPL mRNA水平，試劑盒檢測(cè)LPL活性。20uM羅希土堿與50mg/ml LDL共孵育RAW264.7巨噬細(xì)胞24h后，酶法定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(triglyceride，TG)及總膽固醇（total cholesterol,TC）水平，油紅O染色法檢測(cè)巨噬細(xì)胞脂滴形成情況。20uM羅希土堿處理RAW264.7巨噬細(xì)胞24h后，Western blot

4、（WB）檢測(cè)磷脂酰肌醇-3激酶磷酸化水平（p-PI3K）、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白磷酸化水平（p-mTOR）、PPARγ蛋白水平。外源性加入PPARγ激動(dòng)劑后，檢測(cè)LPL蛋白水平、LPL mRNA水平及LPL活性。外源性加入mTOR激動(dòng)劑后，檢測(cè)LPL、PPARγ蛋白水平、LPL mRNA水平及LPL活性。外源性加入PI3K激動(dòng)劑后，檢測(cè)LPL、p-mTOR、PPARγ蛋白水平、LPL mRNA水平及LPL活性。免疫共沉淀檢測(cè)巨噬細(xì)胞低密

5、度脂蛋白受體（LDLR）與LPL結(jié)合情況。
　　[結(jié)果]羅希土堿呈劑量和時(shí)間依賴性下調(diào) RAW264.7巨噬細(xì)胞LPL的表達(dá)（蛋白及mRNA水平）及活性，進(jìn)而減少巨噬細(xì)胞LPL介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積，細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯減少，TG及TC含量下降。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示，羅希土堿可抑制p-PI3K、p-mTOR及PPARγ的表達(dá)。外源性分別加入p-PI3K、p-mTOR及PPARγ的激動(dòng)劑，羅希土堿抑制巨噬細(xì)胞LPL表達(dá)及活性的作用均被削減。羅希土