應(yīng)力環(huán)境對(duì)組織培養(yǎng)法保存人骨軟骨移植物的影響.pdf

1、目的：同種異體骨軟骨移植是目前公認(rèn)的治療關(guān)節(jié)軟骨缺損的方法。尋找長(zhǎng)期有效的骨軟骨移植物保存方法,對(duì)于建立骨軟骨組織庫(kù),為臨床修復(fù)軟骨缺損提供組織來(lái)源具有重要意義。本研究推測(cè)應(yīng)力環(huán)境對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的體外保存會(huì)產(chǎn)生積極影響。因此通過(guò)在傳統(tǒng)組織培養(yǎng)法的基礎(chǔ)上施加簡(jiǎn)單的應(yīng)力環(huán)境,觀察骨軟骨移植物細(xì)胞功能和細(xì)胞外基質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)的變化,以明確應(yīng)力環(huán)境對(duì)組織培養(yǎng)法體外保存的骨軟骨移植物的保存質(zhì)量的影響,從而改進(jìn)組織培養(yǎng)法保存軟骨的效果。
　　 方

2、法：同種異體骨軟骨移植取自6個(gè)20-40歲器官捐獻(xiàn)者的正常股骨髁,隨機(jī)分為3組分別為:1,對(duì)照組:即新鮮骨軟骨標(biāo)本不經(jīng)過(guò)保存,取材24小時(shí)內(nèi)即行檢測(cè);2,普通組織培養(yǎng)組(普通組):新鮮骨軟骨標(biāo)本放入含20％FBS的DMEM培養(yǎng)瓶中保存,培養(yǎng)瓶立置于37℃、5%CO2、飽和濕度下的孵箱中保存2周[1];3,應(yīng)力加載組織培養(yǎng)組(應(yīng)力組):新鮮骨軟骨標(biāo)本放入含20%FBS的DMEM培養(yǎng)瓶中保存,培養(yǎng)瓶立置于搖床上,并在37℃、50%CO2、飽

3、和濕度下的孵箱中搖動(dòng)保存2周。搖床作為動(dòng)態(tài)加載裝置對(duì)體外保存的骨軟骨移植物施加持續(xù)周期性應(yīng)力,以模擬體內(nèi)關(guān)節(jié)軟骨的應(yīng)力環(huán)境。搖床頻率設(shè)置為1Hz。采用western blotting對(duì)各組關(guān)節(jié)軟骨中的肌動(dòng)蛋白β-actin進(jìn)行半定量分析,用透射電鏡觀察膠原的超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組相比,應(yīng)力組和普通組儲(chǔ)存后的軟骨組織的β-actin的蛋白表達(dá)水平均下降(P＜0.05,P＜0.01);與靜態(tài)環(huán)境下保存相比,應(yīng)力加載組較高的

4、保持了關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)中β-actin的蛋白表達(dá)水平,尤其在深層。(P＜0.05,P＜0.01)。
　　 電鏡觀察顯示應(yīng)力培養(yǎng)組膠原纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)完整性仍存在,但成束排列的纖維減少,密度有所降低,膠原纖維束出現(xiàn)散在溶解、破壞,膠原平均直徑下降為74.6±25.6nm,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但普通組膠原大量破壞,密度明顯降低,多成單束排列,排列紊亂,直徑明顯減小,平均為:51.2±11.5nm。與對(duì)照組和應(yīng)