骨形態(tài)形成蛋白13對(duì)C3H1T1-2細(xì)胞改善心梗大鼠心功能的影響.pdf

1、第一部分高滴度AdBMP13和AdGFP的獲得,C3H10T1/2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及體外生長(zhǎng)分化情況
　　 目的:利用293細(xì)胞擴(kuò)增以獲得高滴度的帶有GFP和BMP13基因的腺病毒,用AdBMP13感染C3H10T1/2細(xì)胞,并觀察目的細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
　　 方法:通過293細(xì)胞培養(yǎng)并利用293細(xì)胞擴(kuò)增AdBMP13和AdGFP腺病毒,收集得到高滴度達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求的腺病毒。通過C3H10T1/2細(xì)胞傳代貼壁至60％～70%時(shí),用腺

2、病毒感染C3H10T1/2細(xì)胞,6小時(shí)后換液,24小時(shí)后熒光倒置顯微鏡觀察綠色熒光表達(dá)并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)感染效率。觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞1周、2周、3周、4周生長(zhǎng)情況,用免疫熒光試驗(yàn)觀察心肌相關(guān)結(jié)構(gòu)和功能蛋白a-MHC及cTNT的表達(dá)。結(jié)果:1.腺病毒經(jīng)293細(xì)胞反復(fù)擴(kuò)增后,可以獲得高滴度的AdBMP13和AdGFP,滴度為5.0～6.0×1010/μL。
　　 2.高滴度的AdBMP13和AdGFP分別感染C3H10T1/2細(xì)胞24小

3、時(shí)后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光表達(dá)效率分別為89.42%、88.41%,均有較高的轉(zhuǎn)染率。
　　 3.倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞形態(tài),隨時(shí)間的推移細(xì)胞由多邊形、梭形逐漸向長(zhǎng)條形轉(zhuǎn)變。
　　 4、免疫熒光結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后細(xì)胞有心肌相關(guān)結(jié)構(gòu)和功能蛋白a-MHC及cTNT的表達(dá),GFP組和BMP13組有明顯差異。
　　 結(jié)論:利用293細(xì)胞擴(kuò)增可以得到高滴度的腺病毒;腺病毒對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞有較高且穩(wěn)定的感染率;經(jīng)轉(zhuǎn)染后的

4、C3H10T1/2細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好并可以向心肌樣細(xì)胞分化。
　　
　　 第二部分 BMP13對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞改善大鼠心功能作用的研究
　　 目的:探討在大鼠心肌梗死微環(huán)境中BMP13能否促進(jìn)C3H10T1/2細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化并且改善心梗大鼠的心功能。
　　 方法:56只SD(Sprague Dawley)雄性大鼠隨機(jī)分成四組:假手術(shù)組(Sham,n=8只),單純心梗組(myocardial

5、infarction,MI,n=16只),MI+pAdEasy-GFP重組腺病毒感染干細(xì)胞組(MI+GFP組,n=16只),MI+pAdEasy-BMPl3重組腺病毒感染干細(xì)胞組(MI+BMP13,n=16只)。各組體重檢測(cè),1次/周;超聲心動(dòng)圖檢測(cè)各組大鼠基線水平及術(shù)后4周心功能,比較各組指標(biāo)變化及差異;Masson's染色比較各組心臟梗死面積差異;免疫熒光檢測(cè)被植入各組細(xì)胞心肌特異性結(jié)構(gòu)蛋白a-MHC及cTnT的表達(dá)。